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1、石河子大学硕士学位论文组织蛋白酶L与兔椎间盘退变相关性研究姓名：秦超申请学位级别：硕士专业：外科学指导教师：刘维钢20100601摘要目的：通过椎间盘内注射组织蛋白酶L，探讨组织蛋白酶L在兔椎间盘退变中的作用。方法：健康大白兔60只，雄性,6～8个月龄,体重2.5～3.0kg,随机分为5组：每组12只，A组（空白对照组，不做任何处理）、B组（阴性对照组，注射生理盐水）、C组（注射组织蛋白酶L浓度为10ng/ul）、D组（注射组织蛋白酶L浓度为20ng/ul）、E组（注射组织蛋白酶L浓度为40ng/ul）。在兔脊柱右侧剃毛备皮约20cm×15cm,常规消毒、铺巾，取右侧卧位,沿左侧12肋
2、末向下至髂脊做纵切口,可见胸腰筋膜后层,向内包被骶棘肌,表面呈白色腱膜状,其外为腹外斜肌起点。切开胸腰筋膜后层,在骶棘肌和腰方肌的外缘与胸腰筋膜前层间钝性分离。近腰方肌前内缘,可触及横突,以第12肋定位暴露第四腰椎（L4）横突，在根部去除此横突，可显露椎体和椎间盘，显露L4/5椎间盘，用1uL微量注射器将组织蛋白酶L或生理盐水注射进椎间盘内。分别于术后3、6周每组各处死6只,取出检测椎间盘髓核中蛋白多糖含量，采用HE染色组织学观察椎间盘的退变特征,免疫组织化学S-P法检测椎间盘组织中MMP3的表达。结果：HE染色组织学观察6周时在实验组及阴性对照组椎间盘中,组织学观察到不同程度的椎间盘
3、退变特征：髄核脊索细胞逐渐减少，并逐渐被纤维软骨组织替代，纤维环与髄核之间失去明显的界限。免疫组织化学染色结果，各时间段实验组基质金属蛋白酶3的阳性率高于空白对照组及阴性对照组（P<0.05）。蛋白多糖含量的测定显示6周时实验组蛋白多糖的含量低于空白对照组及阴性对照组（P<0.05），而3周时各组之间无明显差异（P>0.05）。结论：1.本实验通过椎间盘内蛋白多糖的测定、组织学观察及免疫组化观察证实了兔椎间盘退变的基本特征；2.组织蛋白酶L在椎间盘退变过程中可能起重要作用。关键词：椎间盘退变；组织蛋白酶L；基质金属蛋白酶3；蛋白多糖IAbstractObject:Tostudythem
4、echanismofCathepsinLintheprogressofdegenerationinrabbit’sintervertebraldiscbyinjectingCathepsinLintorabbit’sintervertebraldisc.Methods:60whiterabbitsweredividedinto3groups：experimentalgroupnegativecontrolgroupandblankcontrolgroup,experimentalgroupconsistedof3subgroups,eachgrouphad12rabbits.Theop
5、erationwascarriedoutinrightretroperitonealapproach.TheCathepsinLwasinjectedintoL4andL5discforexperimentalgroup,while0.9%NaCLwasinjectedfornegativecontrolgroup.Histologicalobservationatthe3th,the6thweekaftersurgeryweremeasuredrespectively,whilethecontentofproteoglycansofL4discsweremeasuredbyusing
6、Bittermethod.Immunohistochemical(S-Pmethod)analysesforL3discsatthe3th,the6thweekaftersurgeryweremeasuredrespectively.Results:Histologicobservationrevealedprogressivedecreaseofnotochordalcellsinnucleuspulposus(NP)whichwasincreasinglyoccupiedbydisorganized,hypocellularfibrocartilaginoustissue，andt
7、herewasgenerallossofdefinitionbetweentheNPandannulusfibrosus(AF)atthe6thweek.ImmunohistochemicalanalysesrevealedthatexpressionofMMP-3inallexperimentalgroupsisobviouslyhigherthaninallcontrol(P<0.05)atthe3thweekandthe6ththewee
