山西产苦参种子生物碱类化学成分分析及其资源化价值探讨

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1、山西产苦参种子生物碱类化学成分分析及其资源化价值探讨山西产苦参种子生物碱类化学成分分析及其资源化价值探讨苦参SophoraflavescensAit.为豆科槐属多年生草本或亚灌木状植物，常生于海拔1500m以下的山坡、沙地草坡灌木林中或田野附近，主要分布于我国南北各省区，以及印度、日本、朝鲜、俄罗斯西伯利亚等地。近年来，我国山西长治、河南西部、山东西南部、陕西中南部，以及安徽、湖北、贵州等地开展苦参人工种植及半野生抚育，形成了苦参资源面积不断扩大，苦参药材产量供过于求的现实状态。由此也产生了大量的花和果实，其资源利用价值如何，是药农、生产企业和政府关注的经济民生和社会问题。　　现代研究

2、表明[1-4]，苦参植物根中主要的功效物质为其喹喏里西啶型生物碱类化学成分。该类资源性化学成分具有抗肿瘤、抗乙肝病毒、抗炎、抑菌杀虫等生物活性，常用于清热燥湿、杀虫、利尿等临床配方调剂和中药制剂产品的生产，以及生物农药、兽药等产品的开发[5-6]。目前该类化学物质资源的获取途径主要是从同属植物苦豆子S.alopecuroidesL.种子中获得。依据中药资源化学的研究思路和启示[7-8]，提出了苦参种子是否可替代苦豆子作为苦参素等喹喏里西啶型生物碱资源性化学成分原料的科学问题。　　基于此，在前期研究工作的基础上，以我国目前拥有约20万亩（1亩=667m2）的山西振东制药集团建立的长治苦参

3、人工种植和半野生抚育基地生产的苦参种子为研究对象，分别采用UPLC-Q-TOF-MS和UPLC-TQ-MS技术分析苦参成熟种子中生物碱类资源性化学成分的组成及其含量，并与同属近缘植物苦豆子成熟种子进行比较，以探讨其开发利用价值和资源化利用策略，最终为苦参非药用部位的资源化利用提供科学依据。　　1材料　　药材的采集：苦参成熟种子样品于2015年10月采自山西长治苦参GAP种植基地，苦豆子成熟种子样品于2015年10月采自宁夏盐池，经南京中医药大学段金廒教授鉴定分别为豆科槐属植物苦参S.flavescens及苦豆子S.alopecuroides的成熟种子。标本存放于南京中医药大学江苏省中药

4、资源产业化过程协同创新中心。　　ilford，USA）；ilford，USA）；MassLynx4.1质谱工作站软件（illi-QAdvantage超纯水系统（美国Millipore公司）；KQ-250E型超声波清洗器（昆山禾创超声仪器有限公司）；BeckmanCoulterMicrofuge16型离心机（美国贝克曼库尔特有限公司）。化学对照品苦参碱、氧化苦参碱、槐果碱、氧化槐果碱、槐定碱、槐胺碱、金雀花碱、N-甲基金雀花碱购自合肥博美生物科技有限公司。其纯度经HPLC检测均大于98%。乙腈为色谱纯，购自德国默克公司；去离子水为Milli-QAdvantage超纯水系统自制；其他化学试

5、剂均为分析纯，购自上海国药化学试剂公司。　　2方法与结果　　2.1对照品溶液的配制　　精密称取对照品金雀花碱（1）、氧化苦参碱（2）、氧化槐果碱（3）、槐定碱（4）、槐胺碱（5）、苦参碱（6）、槐果碱（7）适量，加甲醇制成混合对照品贮备液。取一定体积的上述贮备液加甲醇稀释后，制成不同浓度的对照品溶液，用以线性关系考察，其质量浓度分别为0.177～5.68，0.138～4.40，0.129～4.15，0.170～5.45，0.0850～2.72，0.148～4.73，0.236～7.55mgL-1。对照品溶液在注入液相色谱仪前经0.22μm的微孔滤膜滤过。所有对照品溶液均在4℃条件

6、下贮藏。　　2.2供试品溶液的制备[14]　　取0.5g样品粉末（40目），精密称定，置于100mL具塞锥形瓶中，精密加入75%乙醇50mL，称重，静置1h后，室温下超声（40kHz）提取60min，称重，加75%乙醇补足失重，摇匀，13000rmin-1离心10min，取上清液，加75%乙醇稀释10倍，混匀后经0.22μm的微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。　　2.3生物碱类化学成分定性分析　　2.3.1UPLC-Q-TOF-MS/MS条件　　色谱条件：采用ACQUITYUPLCBEHC18色谱柱（2.1mm100mm，1.7μm），以A（10mmolL-1乙酸铵溶液

7、，氨水调pH8）和B（乙腈）流动相，梯度洗脱：0～7min，5%～8%B；7～30min，8%～30%B；30～33min，30%～5%B；流速0.4mLmin-1；柱温30℃；进样体积2μL。　　质谱条件正离子模式，毛细管电压2.0kV，离子源温度120℃，去溶剂化温度350℃，流速600Lh-1，锥孔气流速50Lh-1。检测离子范围m/z100～1000。　　2.3.2样品分析　　苦参干燥种子及苦豆子干燥种子样品总离子流图见图1。其中