芦笋总皂苷含量测定的比色法研究

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1、芦笋总皂苷含量测定的比色法研究作者：赵建华，宋擎，汪素芳，苏强，张立伟【摘要】　　目的考察糖类、氨基酸及黄酮类物质对茴香醛-硫酸法测定芦笋总皂苷含量时的影响，并确定该法的最佳比色条件。方法选用菝葜皂苷元为对照品，采用茴香醛-硫酸法，在429nm处测定糖类、氨基酸及黄酮类物质的吸光度，并利用正交实验设计优化比色条件。结果在429nm处3类物质除黄酮类有较小的末端吸收外均无明显吸收，干扰较小。最优比色条件为样品挥干，加入1%茴香醛无水乙醇溶液0.2ml，100℃水浴30min，冷却后测定。结论该法操作简便，干扰小，比色条件经济，可靠，便于实际应

2、用。【关键词】芦笋边角料总皂苷茴香醛-硫酸法干扰因素考察比色条件优化芦笋AsparagusofficinalisLinn.，学名石刁柏，为百合科天门冬属多年生草本植物，是一种药食两用的植物，其根茎入药，性苦，微辛，微温，功能温肺下气［1，2］。成分分析表明，芦笋中含有游离氨基酸、维生素、微量元素硒等多种营养成分，以及甾体皂苷、多糖、黄酮类等药用成分［3］，具有极高的药用价值。现代药理学研究表明：芦笋提取物对多种癌细胞均有抑制作用，具有降血脂、提高人体免疫功能、抗衰老等功能，其中，甾体皂苷为重要的物质基础［4］。国内外　　2.2茴香醛-硫酸法

3、比色条件的优化　　2.2.1正交实验法优选茴香醛-硫酸法比色条件设计L9（34）正交表对显色剂浓度、反应时间、反应温度、显色剂体积4因素进行考察。水平因素见表1，测定结果及极差分析见表2，方差分析及最小二乘法分析结果见表3～4。表1正交实验因素水平表（略）表2正交实验测定结果及极差分析结果（略）表3正交实验结果方差分析表（略）表4各因素水平最小二乘法平均值（略）　从分析结果的R值得出，4因素对测定结果的影响顺序为反应温度＞显色剂体积＞反应时间＞显色剂浓度，最优显色条件为A3B2C3D1，即5%茴香醛无水乙醇液，吸取0.2ml，100℃水浴3

4、0min。　　查F值分布表可知，F0.05(2,2)=19.0，F0.01(2,2)=99.0，根据方差检验判断标准，当F值大于F0.05小于等于F0.01时，该因素作用显著，记为“*”。从表3得知，4个因素的F值均大于F0.05(2,2)小于F0.01(2,2)，因此判定4个因素对实验影响均较为显著，根据F值大小排序，可以看到4个因素的影响次序为反应温度＞显色剂体积＞反应时间＞显色剂浓度，其结果与极差分析结果相吻合。　　由表4中看到，取各因素最小二乘法平均值中的最大值，得到条件为显色剂浓度5%，反应时间30min，反应温度100℃，显色剂

5、用量0.2ml，其结果与极差分析结果吻合。在实验过程中发现数据中5%茴香醛乙醇溶液与1%两个浓度的差别很小，且5%对茴香醛用量较大，如果用1%浓度代替5%浓度，会大大节省显色剂用量，因此在进行最优工艺验证时，同时对1%浓度条件进行了平行实验，以观察两种浓度的差异。　　2.2.2最优比色条件验证精密吸取“2.1.1”项下菝葜皂苷元溶液1ml共10份，分别置于10支具塞试管中，挥干溶剂，试管从1～10标号，其中1～5号试管加入5%茴香醛乙醇溶液0.2ml，6～10号试管中加入1%茴香醛溶液0.2ml，100℃水浴30min，取出冷却，于429n

6、m下测定吸光度。结果见表5。表5最优比色条件验证结果（略）对上表两组数据进行双样本t检验，结果P=0.118>0.05，表明两组实验方差是一致的，两种浓度之间无显著差异。从测得的吸光度来看，两种浓度显色剂的吸光度值均超过了正交实验数据，符合正交实验结果。因此将显色剂浓度换为1%茴香醛乙醇是可行的。这也从另一角度说明1%的浓度已基本能够反应完全，而过量的茴香醛反而造成不必要的浪费。　综上所述，最后确定茴香醛-浓硫酸法显色条件为1%茴香醛无水乙醇溶液，吸取0.2ml，100℃水浴30min。　　3结论考察了糖类、氨基酸及黄酮类对茴香醛-硫

7、酸法测定芦笋边角料中总皂苷含量时的干扰［10］，在429nm处菝葜皂苷元与芦笋总皂苷均有明显的吸收，而糖类和氨基酸几乎没有吸收，黄酮类有较小的末端吸收。结果说明，糖类和氨基酸对本法的干扰较小，黄酮类有一定干扰，为了准确测定芦笋中总皂苷含量，测定时可以考虑用差示分光光度法来扣除类黄酮物质的干扰。其余6种常见比色法的同步研究结果表明［8］，糖类对乙酸酐浓硫酸法、浓硫酸法及香草醛-高氯酸法影响较大、而3类物质对高氯酸法、香草醛-硫酸法及对二甲氨基苯甲醛法均影响较大，干扰明显。因此，茴香醛-浓硫酸法对总皂苷测定专属性要强于其余6种方法，另外，茴香醛

8、法中，菝葜皂苷元与总皂苷在测定波长429nm处呈现明确的吸收峰，响应明显，通过数次重复实验，此吸收峰较为稳定，优于其余方法。正交实验及极差分析表明，4因素对测定结果的影响顺序为反