玻璃化法保存异体肌腱移植的组织学研究

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1、玻璃化法保存异体肌腱移植的组织学研究：吴富章　卜海富　赵刚　蔡靖宇　郭涛【摘要】：［目的］对玻璃化法与程序冷冻法保存异体肌腱移植后的组织学演变及特性进行观察、分析，以了解其临床应用的可行性及影响因素。［方法］家兔36只，平均分为A组为新鲜自体肌腱移植组，B组为玻璃化法保存异体肌腱移植组，C组为程序冷冻法保存异体肌腱移植组，对术前、术后3、8、12周异体肌腱的形态学、组织学演变进行观察。［结果］玻璃化法保存肌腱完整率高于程序冷冻法，差异有显著性。A、B组移植后较C组粘连轻，光泽好。新生血管、腱细胞成

2、熟早，愈合进程快。［结论］玻璃化法较好地保存了肌腱的细胞外结构，玻璃化法保存异体肌腱移植具有接近正常肌腱的组织学特性，其效果优于程序冷冻法。关键词：【关键词】玻璃化　程序冷冻　肌腱　异体移植　Abstract：［Objective］Toanalyzethehistologicalchangesandmechanicalcharacteristicsaftervitrificationandsloethodfortendonallograft.［Method］Thirtysixrabbitsorp

3、hologicchangesoftenddonialgraftsicroscopicallyandhistologicallyat0,3,8,and12oreheavyadhesionaroundtendonthanthatofGroupAorB.InGroupAandB,neatrixcouldbepreservedperfectly,andthetendonallograftcanbepreservedbyvitrification.Itismoreapplicableclinicallyth

4、ansloascientific)，DCS-25T电子万能实验机(深圳新三思)、二甲基亚砜(DMSO)、乙酰胺、丙二醇(PF)、程序冷冻仪(LinkamTMS94型)、37℃恒温水浴箱。　　1.3标本制作　24只家兔以3％戊巴比妥钠2ml／mg行耳缘静脉麻醉，无菌条件下切取双侧跟腱，长度约3～4cm。冲洗后放入EC液中备用。　　1.4方法　　1.4.1玻璃化法保存　　上述肌腱在4℃条件下经3个梯度玻璃化液(主要由20％DMSO、2.5mol/L乙酰胺、5％PF组成)平衡30min后，直接投入液氮中

5、保存2周以上。　　1.4.2程序冷冻法保存　　上述肌腱在4℃条件下浸入盛有程序冷冻液(主要由15％DMSO)冷存管中平衡30min后放入程序冷冻仪，以2℃／min速度降温至-6℃植冰，平衡30min后以0.5℃／min的速度降温至-50℃，平衡30min后以1℃／min的速度至深低温-80℃，平衡60min，投入液氮中保存2周以上。　　1.4.3肌腱移植　　移植分3组(每组12只家兔，双侧24条肌腱)，A组：新鲜自体肌腱移植组;B组：玻璃化法保存的异体移植组；C组：程序冷冻法保存的异体移植组；移植

6、后分别于3、8、12周处死动物，每组每个时间点各取材6条肌腱观察。3％戊巴比妥钠2ml／kg行兔耳缘静脉麻醉，随机选择实验侧。保留深部1股跟腱组织，切断浅部2股造成1.5cm的缺损，选择相同长度及粗细的肌腱移植，8／0线行改良Kessler法吻合。对侧跟腱切断后原位吻合，作为自体对照。不作外固定。　　1.4.4形态组织学观察　　(1)大体：观察肌腱的形态、色泽、弹性、韧性和完整程度；(2)光镜：HE染色，观察肌腱缝合点愈合情况，免疫反应程度，新血管长入，腱细胞、胶原(CF)成熟度。　　1.4.5统

7、计学处理　　肌腱完整率比较，采用x2检验。　　2结果　　2.1移植前形态学、组织学观察　　2.1.1大体观察　　新鲜肌腱：兔跟腱为乳白色长索状组织，表面光滑，横截面为椭圆形，长径约1.5～2.5mm，短径约0.5～1mm，弹性韧性良好，所有肌腱均完整。玻璃化肌腱：大体形态同新鲜肌腱，弹性韧性良好，有断裂现象。玻璃化法保存肌腱完整率为92.64％；程序低温冷冻肌腱：肌腱为乳白色长索状组织，表面光洁度、弹性韧性稍差于新鲜肌腱，程序冷冻法保存的肌腱完整率为56.17％。　将玻璃化法和程序低温冷冻法保存的

8、肌腱完整率进行比较，经x2检验，统计结果显示两者之间的差异有统计学意义(P<0.01)。　　2.1.2光镜观察　　新鲜肌腱：肌腱表面光滑，其内可见粗大的CF沿纵轴平行分布，排列规整，相互间有交叉，肌腱细胞数量少，沿CF周围纵向分布，排列呈串珠状，核呈椭圆形(图1)。　　玻璃化肌腱：与新鲜肌腱的镜下结构基本一致，可见小部分CF断裂，CF间隙较新鲜组宽。肌腱细胞数量较新鲜组稍少(图2)。　　程序低温冷冻肌腱：肌腱表面光滑，粗大的CF沿纵轴平行分布，排列较新鲜组稍欠规整，相互间有交