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时间:2018-05-01
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1、探讨P.g及致病岛rag基因在正畸牙龈炎性反应中的作用 正畸治疗中牙龈炎性反应是固定矫治过程中的常见并发症,牙龈炎症的发生与诸多因素有关,牙周致病菌是重要因素之一。牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonasgingivalis,P.g)是目前公认的慢性牙周炎的主要致病菌之一,能分泌大量的毒力因子,导致牙周组织破坏,在牙周病的发生、发展中起重要作用。致病岛的发现使人们对细菌致病性有更深的认识。目前rag位点被确定为P.g的致病岛基因之一,研究证实,rag位点失活会使P.g的致病性降低,对牙周组织的破坏减少。rag位点在临床菌株中有4种基因型,分别命名为rag-1、rag-2
2、、rag-3和rag-4,不同基因型的致病能力亦不同。本研究采用16SrDNAPCR和多重PCR对P.g及致病岛rag基因进行检测,分析其与临床指标的关系,探讨P.g及致病岛rag基因在正畸牙龈炎性反应中的作用。 资料和方法 1.材料 牙龈卟啉单胞菌P.g(ATCC33277)、具核梭杆菌(Fusobacteriumnucleatum,F.n)(ATCC25586)和伴放线放线杆菌(Aggregatibacteractinomycetemitans,A.a)(ATCC29522)(购自四川大学华西口腔医学院);牙龈卟啉单胞菌(),用无菌双蒸水补充至总体积2
3、5μL。 多重PCR反应体系:10倍反应缓冲液2.5μL,TaqDNA聚合酶0.5μL,dNTPs0.5μL,模板DNA5.0μL,引物2.0μL(将未经稀释的5对引物的原始液混合稀释后的引物作为应用液,计作引物A,将4种rag基因型的引物混合稀释后的引物计作引物B),用无菌双蒸水补充至总体积25μL。 PCR循环条件:94℃预变性5min,94℃变性30s,57℃退火30s,72℃延伸1min(30个循环);72℃延伸10min。16SrDNAPCR与多重PCR对标准株的检测:以16SrDNA引物扩增P.g2个标准菌株
4、(ATCC33277和es;TAE电泳缓冲液,1.5%琼脂糖凝胶电泳(含0.5mg/L溴化乙锭),电泳条件为电压90V,时间15~20min,凝胶成像分析。 4.统计学分析 采用SPSS13.0统计软件,组间P.g及致病岛rag基因检出率的差异用χ2检验;P.g及致病岛rag基因检出率与患者年龄及临床指数的差异用独立样本的t检验;细菌检出率与各级临床指标之间的关系用Spearman等级相关分析。 结果1.16SrDNAPCR与多重PCR对标准株的检测结果琼脂糖凝胶电泳结果可见,应用16SrDNAPCR技术,P.gATCC33277和P.gn;1.0
5、87mm,对照组(20例)为1.882±0.235mm,牙周炎组(25例)为5.688±0.459mm。牙周炎组高于正畸牙龈炎组,两者均显著高于对照组(P<0.05)。 3.16SrDNAPCR及多重PCR对临床标本检测结果以16SrDNA引物PCR扩增102例受试者临床标本,检出P.g情况见表2;正畸牙龈炎组明显高于对照组,牙周炎组高于正畸牙龈炎组和对照组,三者之间有显著性差异(χ2=15.918,P<0.001)。PCR对正畸牙龈炎患者临床标本P.g检测结果见图3,a为标准P.g菌株阳性对照;b为空白对照;c~n为临床标本,其中
6、除c、h外,均扩增出404bp目的条带。 以pn为引物PCR扩增65例P.g阳性患者临床标本,扩增出致病岛rag基因的有52例,结果见表2。正畸牙龈炎组明显高于对照组,牙周炎组高于正畸牙龈炎组和对照组,三者之间有显著性差异(χ2=30.630,P<0.001)。多重PCR对正畸牙龈炎患者临床标本中致病岛rag基因的检测结果见图4,临床标本a、b均扩增出628bp目的条带,c扩增出979bp目的条带,d扩增出628bp和739bp目的条带,f扩增出739bp目的条带,e扩增出423bp目的条带,g未见目的条带。 4.P.g及致病岛rag基因检出率与GI之间
7、的关系用Spearman等级相关分析P.g及致病岛rag基因检出率均与牙龈指数GI之间存在明显的正相关关系(P<0.01)。65例PCR扩增阳性的患者平均年龄为25.54岁,而阴性的患者年龄平均为16.19岁,二者具有明显差异(t=3.922,P<0.001)(表3)。 讨论 固定矫治是矫治错颌畸形的主要方法,但由于矫治装置的加入,使口腔微生态环境发生很大的变化,原有的微生态平衡状态被破坏,从而对口内定居的微生物产生影响,导致牙龈组织的炎症。P.g是革兰阴性专性厌氧菌,具有一系列逃避宿主防御机制及破坏宿
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