平卧菊三七对糖尿病模型小鼠的降糖作用

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1、平卧菊三七对糖尿病模型小鼠的降糖作用　　目前糖尿病在治疗上主要有注射胰岛素、口服磺酰脲类和双胍类降血糖药物等方法，但是所用药物都不同程度地存在副作用．因此，开发和研究高效低毒，特别是从天然资源中找到既能治疗糖尿病又无副作用的药物，显得特别重要．菊三七属GynuraCass．植物全世界约40种，主要分布于亚洲、非洲及澳大利亚．可全草入药，有治疗跌打损伤、出血、大骨节病、消炎、抗疟、降血糖等功效．国内外学者已对菊三七进行了一些化学研究，从中分离得到生物碱和甾体类化合物［1-5］．菊三七属平卧菊三七Gynuraprocumbens(Lour．)Merr．含有丰富的有机酸成分及黄酮类

2、化合物，具有很好的抗病毒和增强人体免疫力功效，对乙型肝炎病毒、艾滋病病毒以及流感病毒有显着的抑制作用［6］，此外，还具有降糖作用［7］．但是应注意到该属很多植物中存在的双稠吡咯啶生物碱对动物和人的肝毒性和致癌作用［8］．目前国内外对菊三七属植物降糖作用鲜有研究．本文旨在探讨平卧菊三七对糖尿病模型小鼠的降糖作用，为临床糖尿病的药物开发提供新的线索．　　　　1材料与方法　　1.1实验仪器TE2101-L电子天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司);超声波清洗机(昆山超声仪器有限公司);冷冻干燥机(北京松源华兴科技发展有限公司)．　　　　1.2实验试剂0.9%氯化钠注射液(10mL，含

3、NaCl0.09g)，批号:0C85D1(中国大冢制药有限公司);四氧嘧啶(5g)，批号:A7413(Sigma公司);盐酸二甲双胍片(0.25g100Tab)，批号:10071(北京双鹤药业股份有限公司);安稳免调码血糖仪、安稳免调码瓶装血糖试纸(三诺生物传感有限公司)．　　　　1.3受试样品平卧菊三七药材购自安国市场．将干燥药材粉碎后过20目筛，物料比为1∶15，70%乙醇超声提取两次，每次1.5h，减压浓缩，真空冷冻干燥，得干粉作为受试样品．　　　　1.4实验环境动物对温度变化的代谢适应性，受健康状况、年龄、手术处理或药物使用因素等影响，环境温度不同时，药品和化学品对实

4、验动物的毒性也有较大差异．过冷或过热，都会影响实验动物的成模率和增加死亡率，影响实验结果的正确性．本实验选择适宜的温度(25℃)，在通风的环境下适应性饲养小鼠，自由摄食、饮水．　　　　1.5实验动物因小鼠的生命周期短，易于人为控制遗传及环境条件，方便，故利用小鼠建立模型，开展生物医学实验．本实验选择毛色光滑、活动自如、反应灵活、健康、无畸形的雄性ICＲ小鼠，SPF级，体重22～26g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供．许可证号:SCXK(京)2006-0009．　　　　2四氧嘧啶致小鼠糖尿病造模条件优化及稳定性考察　　2.1小鼠性别对造模影响不同性别的动物对四氧嘧啶致糖

5、尿病的敏感性有差异，现已有文献报道，但说法不一．根据文献报道，在同等实验条件下，雌雄小鼠对造模敏感程度不同，雄性小鼠成模率比雌性小鼠高，但是二者死亡率差别不大［9］．可归因于雌性小鼠生理原因，血糖值容易波动，测定时不稳定．因此，选取雄性小鼠造模．　　　　2.2小鼠体重对造模成功率的影响雄性ICＲ小鼠20只，分为两组，18～22g小鼠10只、22～26g小鼠10只，腹腔注射200mg/kg新鲜配制的四氧嘧啶生理盐水溶液，72h后，测定血糖值．取血糖值大于16.5mmol/L的小鼠，实验结果显示:两组小鼠成模率基本一致，但是，16～20g小鼠饲养一周后死亡率较高．因此选取体重22

6、～26g的小鼠．　　　　2.3禁食时间对造模成功率的影响雄性ICＲ小鼠30只，体重22～26g，分为三组，各组小鼠禁食时间依次为8h、12h、16h，每组小鼠腹腔注射200mg/kg新鲜配制的四氧嘧啶生理盐水溶液，72h后取血测定血糖值，取血糖值大于16.5mmol/L的小鼠，三组的成模率分别为:40%、65%、80%．实验结果表明:在相同条件下，禁食时间对造模影响较大．随着禁食时间的延长，造模小鼠平均血糖值增高，成模率增高．结果表明，禁食时间16h为宜．　　　　2.4禁食时间对血糖浓度的影响选取12只经四氧嘧啶造模成功的ICＲ雄性小鼠，分别对其禁食4h、6h、8h、12h，

7、测定血糖浓度(每日只采血一次)，结果发现，禁食后会出现不同程度假阳性情况，分别为1只，3只，4只，10只．为保证结果真实可靠，将测定血糖前的禁食时间定为4h．　　　　3平卧菊三七粗提物对四氧嘧啶糖尿病模型小鼠的降血糖作用　　3.1糖尿病动物模型的建立及分组给药雄性SPF级ICＲ小鼠120只，体重22～26g．实验前禁食不禁水．12h后，除空白组10只腹腔注射等容积生理盐水外，其他小鼠腹腔注射四氧嘧啶(200mg/kg)造糖尿病模型．注射后小鼠自由饮食，72h后，剪尾取血0.1～0.2mL，按葡萄糖测定试