lamp在食品卫生沙门菌检验中的应用价值

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1、LAMP在食品卫生沙门菌检验中的应用价值分离培养法是国内食品沙门菌检测的常用方法，其操作流程繁琐，且需耗费大量的时间。同时，针对免疫学方法，其敏感度不高，针对聚合酶连反应法，其需特殊仪器和设备，导致检测受到限制[1]。环介导等温扩增技术，即LAMP,其属于新型等温核酸扩增方法，操作方式简单、敏感度高等是其主要优点〔2〕。因此，为研究LAMP在食品卫生沙门菌检验中的应用价值，本研究以84件食品样本为对象，采用2种不同的检测方法，取得了一定成效，现将相关报道如下。　　　　1一般资料与方法　　　　1.1一般资料　　　　选取2015年3~12月收集

2、的食品样本84件，其中，包括20件生鲜肉、巧件熟肉制品、18件生水产品、17件非发酵豆制品、4件冷冻生肉、4件生食类蔬菜和6件鲜榨果汁。以肠炎沙门菌为参考菌株。　　　　1.2方法　　　　1.2.1食品样本前增菌以《食品微生物学检验沙门氏菌检验》为依据，分别选取25g食品标本，将其添加至225mlBPin的拍打，基于37°c下，8~18h为培养时间。针对冷冻产品，应以低于45°C为基础条件，解冻时间不得超过15min.　　　　1.2.2　　　　LAMP检测方法分别取食品标本前增菌液lml,基于10000r/min指标下，进行2

3、min的离心，除去上清液后，借助核酸通用提取试剂盒，提取核酸。与此同时，取μl上清液，用于制作待检模板DNA.以食品微生物学检验沙门氏菌检验冲指导，设计引物，并检测食品标本增菌液DNA,且以标准的反应体系为指标。以65°C为条件，进行60min的水浴，基于80°C灭活酶前提下，促使反应体系得以终止。待结束反应后，通过肉眼检测，若表现出混浊现象，则为阳性，若不存在混浊现象，则为阴性。　　　　1.2.3分离培养鉴定基于《食品微生物学检验沙门氏菌检验》指导下，在轻轻晃动经培养过的食品标本前增菌液后，以1ml为标准，将其放置于

4、10mlTTB增菌液中，以42°C为标准，18~24h为培养时间。同时，取1ml放置于10mlSC增菌液中，以37°C为标准，18~24h为培养时间。分别取1环食品标准增菌液，并放置于Bs平板和xLD平板上，以37°C为标准，18~24h为培养时间。选取可疑菌落3个，分别接种于TSI、赖氨酸脱梭酶试验培养基以及营养琼脂平板上，以37°c为标准，18~24h为培养时间。经由生化反应，与沙门菌特征初步吻合，基于营养琼脂平板获取可疑菌落，利用生理盐水，制作浊度适当菌悬液，借助全自动微生物鉴定系统，实施分析。若条件需

5、要，可开展血清学分型。　　　　1.3统计学分析　　　　利用sPss20.0软件对本次研究所有数据进行分析，x2检验用于检验计数资料的比较，差异具有统计学意义用P<0.05表示。　　　　2结果　　　　对比食品标本检验结果，LAMP检测阳性率为10.7%,高于分离培养法的4.8%,差异具有统计学意义（P<0.05），如表1所示。　　　　　　　　3讨论　　　　LAMP检测法，即环介导等温扩增法，属于新型核酸扩增方法，其将4种特异引物设置于靶基因的6个区域内，基于链置换DNA聚合酶的作用下，以65°c为恒温条件，达到扩增目的[3

6、].针对该种检测方法，操作方便、特异性强均属于该其基本特点，在扩增产物的前提下，降低样品检测难度，在检测食品微生物中应用价值较高[4].针对检测结果，可通过肉眼，观察是否存在白色混浊沉淀物，以达到判定扩增情况的目的[5].　　　　本次研究，在对食品样本中的沙门菌属检验过程中，分别采用分离培养法和LAMP检测法进行检测。针对分离培养法，其以《食品微生物学检验沙门氏菌检验》为指导，按照一定的步骤进行检测，即前增菌、增菌、分离、筛选可疑菌落、生化等步骤[6].一般情况下，得到阴性检测结果需4d左右，而得到沙门菌检测结果需7d左右。与此同时，该检测

7、方法过程十分繁琐、复杂，需借助全自动微生物鉴定系统，存在血清分型效价不高的问题，而试剂不仅昂贵，且容易出现失效状况[7].相较于需两次增菌分离培养的分离培养方法，LAMP检测法在提取前增菌液核酸的基础上，方可开展扩增实验，完成扩增过程仅仅需要lh,促使检验流程得以简化，而得到食品样本沙门菌属检验结果仅需要24h,大大缩减了检测时间。针对LAMP检测法，检测人员可利用肉眼，对检测结果进行直接判定，促使其更加直观、形象[8].　　　　本次研究以84件食品样本为对象，分别通过分离培养法和LAMP检测法进行检测。结果显示，LAMP法的检测阳性率为1

8、0.7%,分离培养法的检测阳性率为4.8%.可见，LAMP法在检测食品卫生沙门菌属的应用价值更高。　　　　综上所述，在食品卫生检验中，针对沙门菌属，通过LAMP法进行检测，准确率