多重pcr技术在橡胶树转基因分子鉴定中的应用

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1、热带作物学报2014，35（5）：882-889ChineseJournalofTropicalCrops多重PCR技术在橡胶树转基因分子鉴定中的应用李季，黄天带，华玉伟，黄华孙*中国热带农业科学院橡胶研究所海南儋州571737农业部橡胶树生物学重点开放实验室摘要为了同时检测橡胶树转基因胚状体和叶片中含有的多个目标基因序列，并排除扩增结果的假阴性，利用正交试验首次建立了橡胶树管家基因（HbActin）、目标基因新霉素磷酸转移酶II（NptII）基因和β-葡萄糖苷酸酶（GUS）基因的多重PCR检测体系。利用2种酶（PCRMix酶和Ta

2、q酶）对18个转基因胚状体和叶片进行单一引物PCR扩增和多重PCR检测。结果表明：多重PCR检测结果与单一PCR结果完全一致，且多重PCR体系带型清晰，无非特异性扩增，更易读取。多重PCR检测系统具有简单、准确并且高效等特点，只需要进行一个反应就可以检测多个目标基因序列，因而在转基因分子鉴定上具有非常重要的应用价值与潜力。关键词多重PCR；橡胶树；转基因胚状体；转基因叶片；分子鉴定中图分类号Q781文献标识码AApplicationofMultiplexPCRtotheMolecularIdentificationofTransge

3、nicRubberTree*LIJi，HUANGTiandai，HUAYuwei，HUANGHuasunRubberResearchInstitute，ChineseAcademyofTropicalAgriculturalSciences/KeyLaboratoryofRubberBiology，MinistryofAgriculture，Danzhou，Hainan571737，ChinaAbstractInordertodetectmultipletargetsequencesintransgenicembryosandlea

4、vesofrubbertreesimultaneously，andeliminateanyfalsenegativeamplificationresults，themultiplexPCRsystemofrubbertreeinnerHbActingene，targetsiteNptIIgeneandGUSgeneutilizedtheorthogonaltestswereestablishedforthefirsttimeinthispaper.Eighteentransgenicembryosandleavesofrubbert

5、reeweretestedbymultiplexandsimplexPCRwithtwoenzymesofPCRMixandTaq，respectively，andtheresultswereconsistentforthesethreetargettransgenes，andtheresultofmultiplexPCRwasclear，nononspecificamplification，andeasiertoread.ThemethodofmultiplexPCRwassetuptoidentifymoretargetgene

6、sinonereaction，whichwassimple，practical，reliable，andhighlyefficient，andmightplayanimportantroleinthemoleculardetectionofgeneticallymodifiedingredientsintransgeneplants.KeywordsMultiplexPCR；Rubbertree；Transgenicembryos；Transgenicleaves；Molecularidentificationdoi10.3969/

7、j.issn.1000-2561.2014.05.010聚合酶链式反应（PCR）是转基因分子检测中最同的引物能在同一反应体系中进行特异性扩增，因普遍的方法之一，其检测多为单一靶位点的扩增，此需要对影响其扩增效果的因素进行优化，主要优对多目标基因而言，需要进行多次的PCR反应，化因素有循环参数、反应体积、反应体系、引物间不仅耗时耗力，成本也较高。多重PCR技术最初的碱基配对等[20]。由Chamberlain等[1]提出，是指在一个反应体系中本研究以转基因橡胶树胚状体和叶片为材料，进行多个靶位点扩增的PCR技术。因其具操作简对多重PC

8、R反应体系中的退火温度、引物浓度比单、特异性强、灵敏度高、实验成本低、可加速实例及PCR反应体系的组分进行正交实验优化，首验进程等优点，该技术被广泛应用于人类及家禽疾次建立了橡胶树管家基因引物HbActin-P1/P2与载病的诊断[1