转基因大豆植株数字pcr在分析中的应用

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1、转基因大豆植株数字PCR在分析中的应用1。介绍如今，转基因作物通常在美国种植。根据从美国农业部最近的报告，基因种植作物（主要是玉米，棉花和大豆）种植约2013美国土地一半用于农作物（HTTP：//.ers。农业部政府/媒体/1282246/err162.pdf）。其他国家，如中国和巴西，正在迅速赶上采用和种植转基因作物为工程性状的好处，如除草剂耐受性和抗虫性。不过，公众仍然非常关注基因的潜在风险改性生物（转基因生物）对人类，动物和环境[1]-[6]。一些国家已经采取严格的法规来控制转基因生物，例如，欧洲联盟（欧盟）。检测和量化的转基因生物是必要的执行这些规定。目前，各种DNA聚合酶链反应PC

2、R（PCR）方法通常用于检测和/或量化转基因转基因生物由于其敏感性，例如，定期终点PCR和实时定量PCR（qPCR）方法，尤其是后者[5][7]-[16]。偶尔，其他方法，如生物传感器和免疫测定，也用于分析转基因生物[5][7]—[13]。此外，一些新技术，如新一代测序和数字PCR（dPCR），也被用在分析转基因生物，例如，[15][17][18][19][20][21]。采用反应是基于以下原则：一是充分的DNA模板随后稀释成许多独立的小等体积反应（在威尔斯或液滴中）。以及这些反应中模板分子的数目服从泊松分布。因此，绝对量化可以通过以下方式实现比较正面和负面的反应[14][22][23][2

3、4][25][26]。因此，检测具有以下在qPCR的潜在优势。检测可以准确在未经认证的参考下确定样品中核酸分子的数目材料和标准曲线；一个模板也相应稀释稀释可能出现在模板使检测抑制剂不敏感的抑制剂[27][28]，因此进一步提高精度和效率。这些属性和很多的应用优势使得检测灵敏度或一个很好的工具需要精确的核酸定量，如识别突变或拷贝肿瘤细胞的数量变化，低拷贝核酸靶的检测，或检查基因表达在单细胞水平[26][29][30][31]]。这样的特性数字PCR也应该是有用的分析转基因生物。多项研究已已经报道了使用数字PCR分析转基因生物，例如，[17][18][20][21][28][30][32][33

4、][34]。目前，一些数字PCR系统可从以下公司：Bio-Rad实验室飞雨，和基于一个技术[滴]，和Fluidigm公司与赛默飞世尔科技AppliedBiosystems（芯片）[25][35][36]。发布由赛默飞世尔科技™应用数字PCR系统生物六月，2013被称为quantstudio3D数字PCR系统J.R.ARGIN:0cm0cm0pt"class=MsoNormal>四百零五3.2。设计了具体的检测和荧光定量检测量化RR1和RR2大豆使用检测为了检测特异性检测事件特异性RR大豆，设计荧光定量检测法分析两RR

5、1和RR2大豆，连同传统的非转基因大豆（杰克），以检测控制。为此目的，使用完整的DNA，这是孤立的，通过董事会制定的方法卫生与消费者保护生物技术研究所联合研究中心与转基因生物单元（HTTP：//转基因CRL。JRC。EC。欧罗巴。欧盟/总结/a2704-12_soybean_dnaextr_report.pdf），本研究中所谓的传统方法。在第一次实验中，分别进行靶基因和参考基因反应。平等量（40ng）从RR1基因组DNA，RR2和杰克大豆作为在每个反应的模板，使终浓度为2纳克/毫升（µL）的基因组DNA。TaqManPCR反应后，芯片进行芯片扫描读者，并将获得的数据进行quant

6、studio™3danalysissuite™分析云软件（http：//应用。赛默。/quantstudio3d/）。通过数据分析，对目标[RR1和RR2转基因]或引用的副本得到了各反应每µL基因（表2）：1198，1403.3，和1416份/µL外源凝集素基因的；0.5，1443.7，和0.948份/µL的RR1转基因；0.4，0.4，-数字PCR系统。该系统允许多达20000个反应，以并行运行在一个单一的，封闭的芯片。整个系统包括一个热循环仪，一自动芯片装载机和芯片阅读器，结构紧凑，可以很容易地安装在实验室台。该系统是负担得起的

7、（低于50000美元）。该系统易于使用和允许核酸的绝对定量（如每µl核酸的复制）。因为芯片是封闭的，可以避免潜在的交叉污染。此外，多芯片可以结合起来，实现必要的分区和/或量化的DNA样品中的目标（https：／／应用程序。赛默。/quantstudio3d/）。测试它的有用性在分析转基因生物，转基因大豆称为农达准备就绪（RR）1和2由孟山都公司开发了利用该quantstudio™3D分