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1、中国科技论文在线http://www.paper.edu.cn噬菌体展示筛选与狂犬病毒P互作的宿主蛋#白1,21,21,21,2**董婉玉，李有文，傅振芳，彭贵青5（1.华中农业大学动物医学院，武汉430070；2.华中农业大学农业微生物学国家重点实验室，湖北武汉，430070）摘要：狂犬病是一种人或其他温血动物的病毒性脑脊髓炎，在家畜和野生动物之间可以自然感染与传播，感染后一旦出现临床症状，致死率几乎100%。其病原体是弹状病毒科狂犬病10毒属的狂犬病毒（Rabiesvirus,RABV）。狂犬病毒有五种结构蛋白，其中磷酸化蛋白P是一种多功能的非
2、催化活性蛋白，在病毒的转录和复制过程中发挥重要作用，而狂犬病毒的致病机制仍未完全阐明。本研究首先表达纯化了狂犬病毒P蛋白，以纯化的P蛋白为靶蛋白，通过T7噬菌体展示的方法筛选相互作用蛋白。通过5轮的淘选，筛选得到多个阳性克隆，其中核糖体大亚基蛋白L9（RPL9）与P蛋白特异性相互作用，并通过ELISA、GSTpull-down15得到验证，为进一步阐明狂犬病毒的复制和致病机理奠定基础。关键词：狂犬病毒；P蛋白；噬菌体展示技术；相互作用中图分类号：S855ScreeningtheHostProteinsInteractionwithRabiesVir
3、usP20byPhageDisplaySystem1,21,21,21,2Dongwanyu,Liyouwen,Fuzhenfang,Pengguiqing(1.CollegeofVeterinaryMedicine,HuazhongAgricultureUniversity,Wuhan430070;2.StateKeyLaboratoryofAgriculturalMicrobiology,HuazhongAgriculturalUniversity,HubeiWuhan,430070)25Abstract:Rabiesisakindofvira
4、lencephalomyelitisforpeopleorotherwarm-bloodedanimals.onceappearclinicalsymptoms,thefatalityrateisalmost100%.ThepathogenisRabiesvirus,whichbelongtotheLyssavirusgenusoftheRhabdoviridaefamily.Rabiesvirusiscomposedoffivestructuralproteins.Thephosphorylatedprotein(P),whichisanunca
5、talyticactivityprotein,playsanimportantroleinthevirusreplication,transcriptionandinterferonantagonism.Moreover,thepathogenesisof30rabiesvirusisstillfarfromunderstanding.Toidentifyacellularprotein(s)thatinteractswithRABVPprotein,weperformedaphagedisplay-basedproteininteractions
6、creen.Throughfiveroundsofelutriation,weobtainedseveralpositiveclones.AndtheresultsshowthatRPL9isthetargetofPprotein.BindingbetweenRPL9andPwasalsodemonstratedbyELISA,GSTpull-down.Ourstudylaidthefoundationtofurtherclarifythemechanismofrabiesvirusreplicationandpathogenesis.35Keyw
7、ords:Rabiesvirus;P;Phagedisplaytechnology;Interaction0引言狂犬病又称恐水症，是由狂犬病毒所致的自然疫源性人畜共患神经系统急性[1]40传染病，可以感染人和所有的温血动物，每年导致约6,0000人的死亡。狂犬病[2-3]的分布呈全球性，几乎所有国家和地区都有狂犬病疫情，除南极洲外的其它基金项目：高校博士点基金（项目编号：20130146120004）作者简介：董婉玉（1989-），女，预防兽医学博士研究生，主要从事RABV与宿主蛋白的互作研究通信联系人：彭贵青（1979-），男，教授，博导，从事兽
8、医传染病防控理论和技术研究.E-mail:penggq@mail.hzau.edu.cn-1-中国科技论文在线http:/
