猪附红细胞体α-烯醇化酶与宿主互作蛋白的筛选与鉴定

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1、■？Ｉｒ■Ａ，）；．：１０１８４’学校代码ａＣｎＪＳ分类号：’？一／．．＇ｊ农学硕±学位论文猪附红细胞体ａ－締醇化酶与宿主互作蛋白的筛选与鉴定ＳＣ民臣ＥＮＩＮＧＡＮＤＩＮＤＥＮＴＩＦＩＣＡＴＩＯＮＯＦＴＨＥＩＮＴＥＲＡＣＴＩＮＧＰ民ＯＴＥＩＮＳ呂巨ＴＷＥ丘ＮＨＯＳＴＡＮＤＴＨ巨ＭＹＣＯＰＬＡＳＭＡＳＵＩＳ－ＥＮＯＬＡＳａ丘李巧旭预防兽医学延边大学＇＊—Ｉ？＊？．，ｙ，－｝？一：．一．

2、Ｉ．媒．公。，接抑－４一．，ｖ．卢巧单扣：‘？－＇＇Ｉ－＇＾．７－产古．；学校代码；１０１８４．？Ａ类号：农学硕±学位论文猪附红细胞体ａ－婦醇化酶与宿主互作雲白的筛选与鉴定ＳＣＲＥＥＮＩＮＧＡＮＤＩＮＤＥＮＴＩＦＩＣＡＴＩＯＮＯＦＴＨＥＩＮＴＥＲＡＣＴＩＮＧＰＲＯＴＥＩＮＳＢＥＴＷＥＥＮＨＯＳＴＡＮＤＴＨＥＭＹＣＯＰＬＡＳＭＡ－ＳＵＩＳａＥＮＯＬＡＳＥ李积旭预防兽医学延边大学分类号密级ＵＤＣ学号２０１２０１０５１９延边

3、大学硕±学位论文猪附红细胞体ａ－婦醇化酶与宿主互作蛋白的筛选与鉴定研究生姓名李积旭培养单位延边大学农学院指导教师姓名、职称张守发学科专业预巧兽医学硏究方向分子免疫学论文提交日期２０１５年０６月０１曰本论文己达到农学硕±学位论文要求＇一答辩委员会主？答辩委员会委员鑛裝；－＇Ｉ－■■Ｙｊｚ２ＺＡ－■■、非肖）答辩委员会委员、魏敢饒後答辩委员会委员非Ｐ）答辩委员会委员巧Ｐ）延边大学２０１５年０６月０１日学位论文独创性声明本人郑重声明

4、：所呈交的学位论文系本人在导师指导下独立完成的研究成果。尽我所知，除了文中特别加Ｗ标记和致谢的部分外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含本人为获得任何教育机构的学位或学历而一使用过的材料。与我同工作的同事对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。一本人如违反上迷声明，愿意承担由此引发的切责任和后果。研究生签名日期：＞０＾年ｆ乂月曰．学位论文使用授权声明本人在导师指导下所完成的学位论文，，学校有权保存其电子和纸制文挡可Ｗ借阔或上网公布本学位论文的全部或部分巧容，

5、可Ｗ向有关部口或机构送交并授极其保存、借阅或上网公布本学位论文的全部或部分内容。对于保密论文，按保密的有关规定和程序处理。本学位论文属于：１□，．．保密在年解密后适用于本声明；２不保密因。＾＾＾，研究牛镶名、０占？，：］＾：导师镶名：＾＾期：來ｐ＜ｆ：年月１曰＾＾／延边大学硕±学位抢文￣摘要摘要一种人畜共患病猪附红细胞体病是，猪感染后症状主要表现为黄痘、发热和贫血。猪附红细胞体主要Ｗ黏附于红细胞的方式入侵宿主细胞，而该种黏附由黏附蛋白来调节一，即在宿主细胞和黏附蛋白之间的个很小的空间内发生

6、作用，但对这种粘附作用的功能性基因研究甚少。本试验构建猪外周血单个核细胞酵母双杂交ｃＤＮＡ文库－，再构建猪附红细胞体ａ締醇化酶基因酵母双杂交诱巧表达载－体，在构建的猪外周血单个核细胞ＰＢＭＣ酵母表达文库中筛选与猜附红细胞体ａ嫌醇化酶相互作用的宿主蛋白，并进行鉴定。为猪附红细胞体细胞粘附和侵袭机制在蛋白水平上提供基础研巧。猪外周血单个核细胞酵母双杂交ｃＤＮＡ文库构建：为构建猪化周血单个核‘细胞酵母双杂交ｃＤＮＡ文库，本试验无菌采取建康猪抗凝血，分离外周血单个核细胞，并提取细胞总ＲＮＡ。应用ＳＭＡＲＴ技

7、术反转录合成双链ｃＤＮＡ（ｄｓｃＤＮＡ－ｄｃＤＮＡ）。利用ＣＨＲＯＭＡＳＰＩＮＴ＋ＴＥ４００Ｃｏｌｕｍｎｓ纯化柱纯化ｓ，并与线ＧＡＤＴ７－ＲＹ性化的ｐｅｃ载体共转化酵母菌菌株１８７，Ｗ同源重组的方式在酵母细胞内构建ＰＢＭＣ酵母双杂交ｃＤＮＡ表达文库。结果显示，总ＲＮＡ浓度为１１４３８ｎＬ０〇／〇〇２８．９０ｌｌｌｘｌ０ＣＦＵ／ｍＬ，随机挑取了ｇ心，２６〇〇为１，构建的文库容量为２３个单个茜落进行ＰＣ民扩增鉴定后发现插入的双链ｃＤＮＡ片段平均长度约２０００ｂ＂１００％。此ｃＤＮＡｐ，主要集

8、中在４００ｂｐ４０００ｂｐ之间，且文库重组率为次构建的文库可用于酵母双杂交筛选。－－ＧＢＫＴ７－ｅｎｏｌａｓｅａａ稀醇化酶诱巧载体ｐ的构建：本试验为了替换婦醇化酶基因序列中的终止密码子，根据发表的猪附红细胞体全基因组巧列