作业指导书53(食品菌落总数)

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1、作业指导书编号：ZQCDC／ZY53食品卫生微生物学检验操作规程起草:东晓辉2011年5月1日审核:包图雅2011年5月1日批准:陈玉柱2011年5月5日作业指导书编号ZQCDC／ZY53第1页共3页食品微生物学检验菌落总数测定第2版第1次修订实施日期：2011年05月01日1、目的：依据GB/T4789.2—2010食品卫生微生物学检验菌落总数测定检验规程，规范操作者的检验方法，保证测定结果的准确性。2、适用范围：本标准规定了菌落总数检验方法，本标准适用于各类食品菌落总数的测定。3、责任：使操作者熟悉

2、本规程，并在具体检验中严格遵照操作，确保检测结果准确。4、设备和材料（除微生物实验室常规灭菌培养设备外，其它设备和材料如下：）4.1恒温培养箱：36℃±1℃，42℃±1℃。4.2冰箱：2℃～5℃。4.3恒温水浴箱：46℃±1℃。4.4电子天平：感量0.1g。4.5均质器。4.6振荡器。4.7无菌吸管：1ml(具0.01mL刻度)、10mL、（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头。4.8无菌锥形瓶：容量250mL、500mL。4.9无菌培养皿：直径90mm。4.10PH计或PH比色管或精密PH试纸。4.1

3、1放大镜或（和）菌落总数器或PetrifilmTM自动判读仪。5、培养基和试剂5.1平板计数琼脂培养基5.2磷酸盐缓冲液5.3无菌生理盐水：称取8.5g氯化钠溶于1000mL蒸馏水中，121℃高压灭菌15min。5.41moL/L盐酸（HCL）：移取浓盐酸90mL,用蒸馏水稀释至1000mL。6、检验程序见图17.1操作步骤7.1.1固体和半固体样品：称取25g样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000r/min～1000r/min均质1min～2min，或放入盛有225mL稀释

4、液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2min，制成1：10的样品匀液。7.1.2液体样品：以无菌吸管吸取25mL样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1：10的样品匀液。7.1.3用1mL无菌吸管或吸头（尖端不要触及稀释液面），振摇试管换用一支无菌吸管反复吹打打其混合均匀，制成1：100的样品匀液。7.1.4按以上操作程序，制备10倍系列稀释样品匀液。每递增一次，换用一次1mL无菌吸管或吸头。7.1.5根据对样品污染状况的估计，

5、选择2个～3个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10倍递增稀释时，每个稀释度分别吸取1mL样品液加入两个无菌平皿内。同时作业指导书编号ZQCDC／ZY53第2页共3页食品微生物学检验菌落总数测定第2版第1次修订实施日期：2011年05月01日分别取1mL稀释液加入两个无菌平皿作空白对照。7.1.6及时将15ml～20ml冷却至46℃的平板计数琼脂培养基（可放置于46℃±1℃恒温水浴箱中保温）倾注平皿，并转动平皿混合均匀。7.2增菌7.2.1琼脂凝固后，将平板翻转，36℃±1℃培养48h±

6、2h。水产品30℃±1℃培养72h±3h。7.2.2如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基（约4ml）,凝固后翻转平板，按以上条件进行培养。7.3菌落计数可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落开成单位（colony-formingunits,CFU）表示。7.3.1选取菌落数在30CFU～300CFU之间、无蔓廷菌落生长的平板计数菌落总数量。低于30CFU的平板记录具体菌落数，大于300的可记录为多不可

7、计。每个稀释度的的菌落数应采用两个平板的平均数。7.3.2其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2，代表一个平板菌落数。7.3.2当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条链作为一个菌落计数。8、结果表述8.1菌落总数的计算方法8.1.1若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每克（或毫升）中菌落总数

8、结果。8.1.2若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按以下公试计算N=∑C/(n1+0.1n2)d式中：N—--样品中菌落数；∑C—平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和；N1---第一个适宜稀释度平板上的菌落数N2----第二个适宜稀释度平板上的菌落数d-----稀释因子（第一稀释度）。8.1.3若所有稀释度的平板上菌落数均大于300，则对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数