食品卫生微生物学检验操作规程作业指导书53(食品菌落总数)格式

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1、作业指导书编号:ZQCDC/ZY53起草:东晓辉审核:包图雅批准:陈玉柱食品卫生微生物学检验操作规程2011年5月1日2011年5月1日2011年5月5日作业指导书编号ZQCDC/ZY53第1页共顶食品微生物学检验菌落总数测定笫2版第1次修订实施日期：2011年05月01日1、目的：依据GB/T4789.2-2010食品卫生微生物学检验菌落总数测定检验规程，规范操作者的检验方法，保证测定结果的准确性。2、适用范围：本标准规定了菌落总数检验方法，本标准适用于各类食品菌落总数的测定。3、责任：使操作者熟悉木规程，并在具体检验屮严格遵照操作，

2、确保检测结果准确。4、设备和材料（除微主物实验室帘规灭菌培养设备外，其它设备和材料如2）4.1恒温培养箱：36°C±1°C,42°C±l°Co4.2冰箱：2°C〜5°C。4.3恒温水浴箱：46°C±l°Co4.4电子天平：感量0.Igo4.5均质器。4.6振荡器。4.7无菌吸管:1ml（AO.OlmL刻度）、10mL、（具0.1虬刻度）或微量移液器及吸头。4.8无菌锥形瓶：容量250mL、500niLo4.9无菌培养皿：直径90mmc4.10PH计或PH比色管或精密PH试纸。4.11放人镜或（和）菌落总数器或Petrif订十口动判读仪。

3、5、培养基和试剂5.1平板计数琼脂培养基5.2磷酸盐缓冲液5.3无菌生理盐水：称取&5g氯化钠溶于lOOOmL蒸镭水中，121°C高压灭菌15min05.4ImoL/L盐酸（HCL）:移取浓盐酸90mL,用蒸帽水稀禅至lOOOmLo6、检验程序见图17.1操作步骤7.1.1固体和半固体样品：称取25g样品置盛侑225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000r/min^1000r/min均质lmin~2min,或放入盛有225mL稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打lmin〜2min,制成1：10的样品匀液。7.1.2液体样

4、品：以无菌吸管吸取25mU样品置盛冇225皿磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数屋的无菌玻璃珠）屮，充分混匀，制成1：10的样品匀液。7.1.3用lmL无菌吸管或吸头（尖端不要触及稀释液面），振摇试管换用一支无菌吸管反复吹打打其混合均匀，制成1：100的样品匀液。7.1.4按以上操作程序，制备10倍系列稀释样品匀液。每递增一次，换用一次1讥无菌吸管或吸头。7.1.5根据对样品污染状况的估计，选择2个〜3个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10倍递增稀释时，每个稀释度分別吸収lmL样詁液加入两个无菌平皿内。同

5、时作业指导书编号ZQCDC/ZY53笫2页共顶食品微生物学检验菌落总数测定笫2版第1次修订实施日期:2011年05月01日分別取ImL稀释液加入两个无菌平皿作空白对照。7.1.6及时将15ml〜20ml冷却至46°C的平板计数琼脂培养基（可放査于46°C±1°C恒温水浴箱中保温）倾注平皿，并转动平皿混合均匀。7.2增菌7.2.1琼脂凝I司后，将平板翻转，36°C±1°C培养48h±2ho水产品30°C±l°C培养72h±3h。7.2.2如果样晶中可能含有在琼脂培养基表而弥漫牛长的菌落吋，可在凝固后的琼脂表而覆盖一薄层琼脂培养基（约4ml

6、），凝固后翻转平板，按以上条件进行培养。7.3菌落计数对川肉眼观察，必要时川放人镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落开成单位（colony-formingunits,CFU）表示。7.3.1选取菌落数在30CFU〜300CFU之间、无蔓廷菌落生长的平板计数菌落总数量。低于30CFU的平板记录具体菌落数，大丁300的可记录为多不可计。每个稀释度的的菌落数应采用两个平板的平均数。7.3.2具屮一个平板有较大片状菌落牛长时，则不宜采川，而应以无片状菌落主长的平板作该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，阳其余一半中

7、菌落分布又很均匀，即町计算半个平板后乘以2,代表一个平板菌落数。7.3.2当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条链作为一个菌落计数。8、结果表述8.1菌落总数的计算方法8.1.1若只有一个稀釋度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌数的平均值,再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每克（或毫升）中菌落总数结果。8.1.2若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内吋，按以下公试计算N=EC/（ni+0.ln2）d式中:N——样品中菌落数；EC—平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数Z和；N1—第一个适宜稀释度平板上的菌落数

8、N2一一笫二个适宜稀释度平板上的菌落数d——稀释因了（第一稀释度）。8.1.3若所有稀释度的平板上菌落数均人于300,则对稀禅度最高的平板进行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数