乳与乳制品微生物检验鲜乳中抗生素残留检测

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乳与乳制品微生物检验鲜乳中抗生素残留检测YLNB3.5方法一：1.引用依据：GB/T4789.27-20032.范围本方法适用于能杀灭嗜热乳酸链球菌的各种常用抗生素的检验3.仪器及器材2.1冰箱：4℃～-20℃；2.2恒温培养箱：36±1℃；2.3恒温水浴锅：36±1℃、79±1℃；2.4天平；2.5灭菌吸管：1ml、10ml；2.6灭菌试管：16mm×160mm；2.7100℃温度计；2.8蜡笔；2.9灭菌广口瓶或三角烧瓶：容量为500ml；2.10灭菌玻璃珠：直径约5mm；2.11酒精灯；2.12试管架；

12.13灭菌刀、剪子、灭菌镊子等。4.菌种、培养基和试剂3.1菌种：嗜热乳酸链球菌。3.2脱脂乳：经113℃灭菌20min。3.34％2，3，5-氯化三苯四氮唑（TTC）水溶液：称取1gTTC，溶于5ml灭菌蒸馏水中，装褐色瓶内于7℃冰箱保存，临用时用灭菌蒸馏水稀释至五倍。如遇溶液变为玉色或淡褐色，则不能再使用。5.检验程序鲜乳中抗生素残留检验程序见下图。报告不显色加TTC指示剂，36±1℃水浴30min红色抗生素阴性检样80℃，加热5min加菌液，36±1℃水浴2h冷却37℃以下报告不显色者抗生素阳性显色者抗生素阴性性36±1℃水浴30min

26.方法6.1菌液制备：将菌液移种脱脂乳，经36±1℃培养15h后，以灭菌脱脂乳1：1稀释待用。6.2取检样9ml于试管内，80℃水浴加热5min冷却37℃以下，加菌液1ml，36±1℃水浴培养2h，加TTC0.3ml,36±1℃水浴培养30min,观察如为阳性，再于水浴中培养30min作第二次观察，每份检样作两份，另外再作阴性和阳性对照各一份，阳性对照管用无抗生素的

3乳8ml加抗生素及菌液和TTC。阴性对照管用无抗生素乳9ml加菌液和TTC。7.判断方法：准确培养30min观察结果，如为阳性，再继续培养30min作第二次观察。观察时要迅速，避免光照过久发生干扰。乳中有抗生素存在，则检样中虽加菌液培养物，但因细菌的繁殖受到抑制，因此指示剂TTC不还原，不显色。与此相反，如果没用抗生素存在，则加入菌液即行增殖，TTC被还原而显红色，也就是说检样呈乳的原色为阳性，呈红色为阴性。具体内容见表1和表2。表1显色状态判断标准显色状态判断未显色者微红色者桃红色－红色阳性可疑阴性表2检测各种抗生素的灵敏度抗生素名称最低捡出量青霉素链霉素庆大霉素卡那霉素0.004单位0.5单位0.4单位5单位方法二：抗生素检测试剂盒

4具体操作请参照试剂盒说明书