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1、中华人民共和国国家标准GB5009.85—2016食品安全国家标准食品中维生素B2的测定2016-12-23发布2017-06-23实施中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会发布国家食品药品监督管理总局GB5009.85—2016前言本标准代替GB/T5009.85—2003《食品中核黄素的测定》、GB/T9695.28—2008《肉与肉制品维生素B2含量测定》、GB/T7629—2008《谷物中维生素B2测定》和GB5413.12—2010《食品安全国家标准婴幼儿食品和乳品中维生素B2的测定》。本标准与GB/T5009.85—2003相比,主要变化如下:———标
2、准名称修改为“食品安全国家标准食品中维生素B2的测定”;———增加了高效液相色谱法;———删除了微生物法。ⅠGB5009.85—2016食品安全国家标准食品中维生素B2的测定1范围本标准规定了食品中维生素B2的测定方法。本标准第一法为高效液相色谱法,第二法为荧光分光光度法,适用于各类食品中维生素B2的测定。第一法高效液相色谱法2原理试样在稀盐酸环境中恒温水解,调pH至6.0~6.5,用木瓜蛋白酶和高峰淀粉酶酶解,定容过滤后,滤液经反相色谱柱分离,高效液相色谱荧光检测器检测,外标法定量。3试剂和材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一
3、级水。3.1试剂3.1.1盐酸(HCl)。3.1.2冰乙酸(CH3COOH)。3.1.3氢氧化钠(NaOH)。3.1.4三水乙酸钠(CH3COONa·3H2O)。3.1.5甲醇(CH3OH):色谱纯。3.1.6木瓜蛋白酶:活力单位≥10U/mg。3.1.7高峰淀粉酶:活力单位≥100U/mg,或性能相当者。3.2试剂配制3.2.1盐酸溶液(0.1mol/L):吸取9mL盐酸,用水稀释并定容至1000mL。3.2.2盐酸溶液(1+1):量取100mL盐酸,缓慢倒入100mL水中,混匀。3.2.3氢氧化钠溶液(1mol/L):准确称取4g氢氧化钠,加90mL水溶解,冷
4、却后定容至100mL。3.2.4乙酸钠溶液(0.1mol/L):准确称取13.60g三水乙酸钠,加900mL水溶解,用水定容至1000mL。3.2.5乙酸钠溶液(0.05mol/L):准确称取6.80g三水乙酸钠,加900mL水溶解,用冰乙酸调pH至4.0~5.0,用水定容至1000mL。3.2.6混合酶溶液:准确称取2.345g木瓜蛋白酶和1.175g高峰淀粉酶,加水溶解后定容至50mL。临用前配制。1GB5009.85—20163.2.7盐酸溶液(0.012mol/L):吸取1mL盐酸,用水稀释并定容至1000mL。3.3标准品维生素B2(C17H20N4O6
5、,CAS号:83-88-5):纯度≥98%。3.4标准溶液配制3.4.1维生素B2标准储备液(100μg/mL):将维生素B2标准品置于真空干燥器或装有五氧化二磷的干燥器中干燥处理24h后,准确称取10mg(精确至0.1mg)维生素B2标准品,加入2mL盐酸溶液(1+1)超声溶解后,立即用水转移并定容至100mL。混匀后转移入棕色玻璃容器中,在4℃冰箱中贮存,保存期2个月。标准储备液在使用前需要进行浓度校正,校正方法参见附录A。3.4.2维生素B2标准中间液(2.00μg/mL):准确吸取2.00mL维生素B2标准储备液,用水稀释并定容至100mL。临用前配制。3
6、.4.3维生素B2标准系列工作液:分别吸取维生素B2标准中间液0.25mL、0.50mL、1.00mL、2.50mL、5.00mL,用水定容至10mL,该标准系列浓度分别为0.05μg/mL、0.10μg/mL、0.20μg/mL、0.50μg/mL、1.00μg/mL。临用前配制。4仪器和设备4.1高效液相色谱仪:带荧光检测器。4.2天平:感量为1mg和0.01mg。4.3高压灭菌锅。4.4pH计:精度0.01。4.5涡旋振荡器。4.6组织捣碎机。4.7恒温水浴锅。4.8干燥器。4.9分光光度计。5分析步骤5.1试样制备取样品约500g,用组织捣碎机充分打匀均质
7、,分装入洁净棕色磨口瓶中,密封,并做好标记,避光存放备用。称取2g~10g(精确至0.01g)均质后的试样(试样中维生素B2的含量大于5μg)于100mL具塞锥形瓶中,加入60mL的0.1mol/L盐酸溶液,充分摇匀,塞好瓶塞。将锥形瓶放入高压灭菌锅内,在121℃下保持30min,冷却至室温后取出。用1mol/L氢氧化钠溶液调pH至6.0~6.5,加入2mL混合酶溶液,摇匀后,置于37℃培养箱或恒温水浴锅中过夜酶解。将酶解液转移至100mL容量瓶中,加水定容至刻度,用滤纸过滤或离心,取滤液或上清液,过0.45μm水相滤膜作为待测液。注:操作过程应避免强光照射。不加
8、试样,按同
