国家标准：gb 541312-2010 食品安全国家标准 婴幼儿食品和乳品中维生素b2 的测定

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1、中华人民共和国国家标准GB5413.12—2010食品安全国家标准婴幼儿食品和乳品中维生素B2的测定NationalfoodsafetystandardDeterminationofvitaminB2infoodsforinfantsandyoungchildren,milkandmilkproducts2010-03-26发布2010-06-01实施中华人民共和国卫生部发布GB5413.12—2010前言本标准代替GB/T5413.12-1997《婴幼儿食品和乳粉维生素B2的测定》。本标准与GB/T5413.12-1997相比，主要变化如下：—

2、—标准名称改为《婴幼儿食品和乳品中维生素B2的测定》。——取消了方法一荧光分光光度法；——对原标准的结构进行了修改；——混合酶液中增加了酸性磷酸酶，以解决添加核黄素磷酸盐作为维生素B2强化剂的样品测定；——样品处理方法中增加了“避免强光照射”的注意点；——外标法定量采用多点标准曲线法；——在结果计算时明确样品中维生素B2含量以核黄素计；——增加附录A标准溶液的液相色谱图。本标准附录A为资料性附录。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：——GB5413-1985、GB/T5413.12-1997。IGB5413.12—2010食品安全国家标准婴幼儿

3、食品和乳品中维生素B2的测定1范围本标准规定了婴幼儿食品和乳品中维生素B2的测定方法。本标准适用于婴幼儿食品和乳品中维生素B2的测定。2规范性引用文件本标准中引用的文件对于本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本标准。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。3原理试样在稀盐酸环境中恒温水解，酶解，经C18反相色谱柱分离，用荧光检测器（Ex：462nm，Em：522nm）检测，外标法定量。4试剂和材料除非另有规定，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。4.1盐酸。4.

4、2三水乙酸钠。4.3冰乙酸。4.4甲醇：色谱纯。4.5维生素B2（核黄素）标准品：纯度≥99%。4.6盐酸（1+1）：量取100mL盐酸（4.1）缓慢倒入100mL水中，混匀。4.7盐酸（0.1mol/L）：吸取9mL盐酸（4.1），溶于1000mL水中。4.8盐酸（0.01mol/L）：吸取0.1mol/L盐酸（4.7）50mL，用水稀释并定容至500mL。4.9乙酸钠溶液（0.05mol/L）：称取6.80g三水乙酸钠（4.2），加900mL水溶解，用冰乙酸调pH值至4.0～5.0，用水定容至1000mL。经0.45μm微孔滤膜过滤。4.10

5、乙酸钠溶液（2.0mol/L）：称取27.22g三水乙酸钠（4.2），用水溶解并定容至100mL。4.11混合酶溶液：称取2.345g木瓜蛋白酶（活力单位≥600U/g）、1.175g淀粉酶（活力单位≥4000U/g）和1.000g酸性磷酸酶（活力单位≥4000U/g），用水定容至50mL。临用前配制。4.12标准溶液1GB5413.12—20104.12.1维生素B2标准储备液（250μg/mL）：称取25mg（精确至0.1mg）维生素B2标准品（4.5），加入盐酸（4.6）2mL，超声溶解后，立即用水转移并定容至100mL。置于棕色玻璃容器中

6、在0℃～4℃冰箱贮存，保存期为3个月。4.12.2维生素B2标准中间液：准确吸取4.00mL标准储备液（4.12.1），用水稀释并定容至100mL，此溶液中维生素B2浓度为10μg/mL。临用前配制。4.12.3维生素B2标准系列工作液：分别吸取维生素B2标准中间液（4.12.2）0.00mL、0.50mL、1.00mL、2.00mL、5.00mL、10.00mL，用水溶解并定容至100mL。该标准系列浓度分别为0.00μg/mL、0.05μg/mL、0.10μg/mL、0.20μg/mL、0.50μg/mL、1.00μg/mL。临用前配制。5仪

7、器和设备5.1高效液相色谱仪，带有荧光检测器。5.2高压灭菌锅。5.3pH计：精度为0.01。5.4组织捣碎机。5.50.45μm微孔水相滤膜。5.6天平：感量1mg和0.1mg。6分析步骤6.1试样的处理称取5g～10g（精确至0.01g）试样（如有必要，将试样放入捣碎机中捣碎；试样中含维生素B25μg以上）于100mL三角瓶中，加60mL0.1mol/L盐酸（4.7），充分摇匀，用棉花塞和牛皮纸封口，放入高压灭菌锅内，在121℃下保持30min，待冷却至40℃以下后取出，轻摇数次；用2.0mol/L乙酸钠溶液（4.10）调pH值至4.0左右，

8、加入2.0mL混合酶溶液（4.11），摇匀后，置于37℃培养箱中过夜；将酶解液转移至100mL容量瓶中，用水定容至刻度，用定量滤纸过滤，