食用油中苯并（a）芘的快速检测 胶体金免疫层析法（KJ201910）.docx

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1、附件10食用油中苯并（a）芘的快速检测胶体金免疫层析法(KJ201910)1　范围本方法规定了食用油中苯并（a）芘的胶体金免疫层析快速检测方法。本方法适用于食用油中苯并（a）芘的快速测定。2　原理本方法采用竞争抑制免疫层析原理。样品中的苯并（a）芘经提取后与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制抗体和试纸条或检测卡中检测线（T线）上抗原的结合，从而导致检测线颜色深浅的变化。通过检测线与控制线（C线）颜色深浅比较，对样品中苯并（a）芘进行定性判定。3　试剂和材料除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的二级水。3.1　试剂3.1.1正己烷：色谱纯。3.

2、1.2乙腈：色谱纯。3.1.3二甲基亚砜（DMSO）。3.1.4NaH2PO4•2H2O。3.1.5Na2HPO4•12H2O。3.1.6氯化钠。3.1.7吐温-20。3.1.8氢氧化钠溶液（2mol/L）：称取80g氢氧化钠用水溶解，并定容至1L。3.1.9PBST溶液：称取0.2965gNaH2PO4•2H2O、2.9gNa2HPO4•12H2O、8.76g氯化钠与0.55g吐温-20用水溶解并定容至1L。3.2　参考物质苯并（a）芘参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量见表1，纯度均≥95%。—5—表1苯并（a）芘参考物质中文名称、英文

3、名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量中文名称英文名称CAS登录号分子式相对分子质量苯并（a）芘Benzo(a)pyrene50-32-8C20H12252.32注：或等同可溯源物质。1.1　标准溶液的配制苯并（a）芘标准储备液（0.1 mg/mL）：精密称取适量苯并（a）芘标准品（3.2），置于10mL容量瓶中，用乙腈（3.1.2）溶解并稀释至刻度，摇匀，制成浓度为0.1 mg/mL的苯并（a）芘标准储备液；或可直接购买苯并（a）芘标准储备液。0℃~5℃避光保存备用，有效期1年。1.2　材料苯并（a）芘胶体金免疫层析试剂盒，适用基质为食用油。3.4.1金标微孔（含

4、胶体金标记的特异性抗体）。3.4.2试纸条或检测卡。2　仪器和设备2.1　移液器：100µL、1mL、5mL和10mL。2.2　涡旋混合器。2.3　离心机：转速≥4000r/min。2.4　电子天平：感量为0.01g。2.5　氮吹仪或空气吹干仪（带温度控制）。3　分析步骤3.1　试样制备取适量有代表性样品充分混匀。3.2　试样提取和净化除脂称取10g油样于离心管中，加入5mL正己烷（3.1.1）和15mLDMSO（3.1.3）并混合均匀。漩涡振荡2min，然后4000r/min离心2min。弃去上层正己烷层。加入5mL正己烷（3.1.1），漩涡振荡30s，然后4000

5、r/min离心30s。弃去上层正己烷层。加入10mL氢氧化钠溶液（2mol/L）（3.1.8）和15mL正己烷（3.1.1），漩涡振荡30s，然后4000r/min离心30s。吸取上层正己烷层于15mL离心管，4000r/min离心2min。取全部正己烷层于氮吹管中，50℃氮吹或空气吹10min，吹干后加入200μLDMSO（3.1.3）复溶，混合均匀，此为待测液。3.3　测定步骤打开试纸筒，取出所需数量的红色反应微孔（取出微孔后，立即盖好桶盖，以防受潮）。往微孔中加入200μL的PBST溶液，再加入50μL待测液，上下抽吸5~10次至微孔试剂混合均匀，室温（20℃~

6、25℃）反应7min。将已做好标记的试纸条插入至上述红色微孔中，使样品垫充分进—5—入样品中，并计时7min。从微孔中取出试纸条，弃去试纸条下端的样品垫，进行结果判定。1.1　质控试验每批样品应同时进行空白试验和加标质控试验。1.1.1　空白试验称取空白试样，按照5.2和5.3步骤与样品同法操作。1.1.2　加标质控试验准确称取空白试样（精确至0.01g）置于玻璃试剂瓶中，加入一定体积的苯并（a）芘标准储备液（0.1mg/mL）（3.3.1），使试样中苯并（a）芘浓度为10μg/kg，按照5.2和5.3步骤与样品同法操作。2　结果判定方式由于长时间放置会引起质控线（C

7、线）与检测线（T线）颜色的变化，需在规定时间内进行结果判定。试纸条与检测卡如图1所示。结果判定也可根据产品说明书进行。2.1　读数仪测定结果通过读数仪对结果进行判读，根据不同厂家仪器规定进行判读。无效：质控线（C线）不显色，无论检测线（T线）是否显色，均表示实验结果无效。阳性：若检测结果显示“+”（阳性），表示试样中含有待测组分且其含量大于等于方法检出限。阴性：若检测结果显示“-”（阴性），表示试样中不含待测组分或其含量低于方法检出限。2.2　目视判定通过对比质控线（C线）和检测线（T线）的颜色深浅进行结果判定。无效：质控线（C线）不显色，无论检测线