最新第六章--工业微生物产生菌的分离筛选教学讲义PPT.ppt

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1、第六章--工业微生物产生菌的分离筛选菌株分离：就是将一个混杂着各种微生物的样品通过分离技术区分开，并按照实际要求和菌株的特性采取迅速、准确、有效方法对它们进行分离、筛选，进而得到所需微生物的过程。工业微生物产生菌的筛选包括两部分：（1）从自然界分离（2）野生菌株进一步纯化并进行代谢产物的鉴定白霉奶酪法国蓝纹绵羊奶酪大孔奶酪其臭不亚于臭袜子的“戈达”菌种的分离和筛选一般可分为采样、富集、分离、产物鉴别这几个步骤。分离的目的新菌种的分离是要从混杂的各类微生物中依照生产的要求、菌种的特性，采用各种筛选方法，快速、准确地把所需要的菌种挑选出来。实验室或生产用菌种若不慎污染了杂菌，也必须重新

2、进行分离纯化。污染的芽孢杆菌第一节含微生物样品的采集采样对象：以采集土壤为主。一般园田土和耕作过的沼泽土中，以细菌和放线菌为主，富含碳水化合物的土壤和沼泽地中，酵母和霉菌较多，如一些野果生长区和果园内。采样的对象也可以是植物，腐败物品，某些水域等。一、土壤中采样土壤是人类最丰富的菌种资源库。一般情况下，土壤中含细菌数量最多，且每克土壤的含菌量大体有如下的递减规律：细菌（108）>放线菌（107）>霉菌（106）>酵母菌（105）>藻类（104）>原生动物（103），（一）根据土壤特点1、土壤有机质含量和通气状况耕作土、菜园土、津郊土壤；森林土，采土样最好的土层是5～25cm。一般每

3、克土中含菌数约几十万到几十亿个，并且各种类型的细菌和放线菌几乎都能分离到。2、酸碱度和植被状况偏碱的土壤（pH7.0～7.5）环境，适合于细菌、放线菌生长。反之在偏酸的土壤（pH7.0以下）环境下，霉菌、酵母菌生长旺盛。3．地理条件南方土壤比北方土壤中的微生物数量和种类都要多，特别是热带和亚热带地区的土壤。4．季节条件夏季到秋季，约有7～10个月处在较高的温度和丰富的植被下，土壤中微生物数量比任何时候都多，因此，秋季采土样最为理想。（二）采样方法用取样铲，将表层5cm左右的浮土除去，取5～25cm处的土样10～25g，装入事先准备好的塑料袋内扎好。北方土壤干燥，可在10～30cm处

4、取样。给塑料袋编号并记录地点、土壤质地、植被名称、时间及其他环境条件。一般样品取回后应马上分离，以免微生物死亡。二．根据微生物生理特点采样1.根据微生物营养类型森林土纤维素酶产生菌；肉类加工厂附近和饭店排水沟蛋白酶和脂肪酶的产生菌；面粉加工厂、糕点厂、酒厂及淀粉加工厂蛋白酶、糖化酶的菌株；蜂蜜、蜜饯、甜果酵母；２.根据微生物的生理特性高温酶产生菌时，通常到温度较高的南方，或温泉、火山爆发处及北方的堆肥中采集样品；分离低温酶产生菌时可到寒冷的地方，如南北极地区、冰窖、深海中采样；分离耐压菌则通常到海洋底部采样。三、特殊环境下采样1．局部环境条件的影响海鞘、海参体内的微生物可产生具有细

5、菌毒性和杀菌活性的化合物。从海绵体内的共生或共栖的细菌中分离到抗白血病、鼻咽癌的抗癌物质。深海鱼类肠道内的嗜压古细菌，80%以上的菌株可以生产EPA和DHA；从鳕鱼肠道中分离到一株pj20细菌，产EPA14.78mg/L；得克萨斯州中南部的一个岩洞中存在着大量嗜碱性的，能进行氨氧化和产几丁质酶的微生物，其原因是这里生活这2000万只蝙蝠，其排泄物造成了洞内10m深的丰富营养层，这种特殊的环境对该种微生物起了选择和富集的作用。从考拉(Koala)熊肠中也曾分离到萜烯分解酶的产生菌2．极端环境条件的影响生活在极端环境中的微生物具有不同与一般微生物的遗传特性、特殊结构和生理机能，可以产生

6、一些特殊的代谢产物和酶制剂。如嗜冷菌→低温酶；嗜热菌→高温酶；嗜碱菌→碱性蛋白酶海洋是新抗生素的重要来源。许多海洋生物体内都含有微生物，这些微生物为宿主抵御病害起着关键作用。因此，从鱼组织和虾消化道里分离筛选抗癌药物和抗炎症药物是一个有效地途径。第二节含微生物样品的富集培养富集培养：是在目的微生物含量较少时，根据微生物的生理特性设计一种选择性培养基，创造有利的生长条件，使目的微生物在最适环境下迅速生长繁殖，数量增加，由自然条件下的劣势种变成人工环境下的优势种以利分离到所需要的菌株。富集培养主要根据微生物的碳、氮源、pH、温度、需氧等生理因素加以控制。一般可从以下几个方面来进行富集。

7、一、控制培养基的营养成分在增殖培养基中人为加入相应的底物作惟一碳源或氮源。那些能分解利用的菌株因得到充足的营养而迅速繁殖，其他微生物则由于不能分解这些物质，生长受到抑制。如:分离水解酶产生菌→以相应底物为惟一碳源。分离耐高渗酵母菌→培养基中30%～40%葡萄糖连续富集培养如以苯胺作惟一碳源对样品进行富集培养，待底物完全降解后，再以一定接种量转接到新鲜的含苯胺的富集培养液中，如此连续移接培养数次。同时将苯胺浓度逐步提高，便可得到降解苯胺占优势的菌株培养液，采用稀释涂布法