最新3实验三细菌形态结构观察及革兰染色全解教学讲义ppt课件.ppt

《最新3实验三细菌形态结构观察及革兰染色全解教学讲义ppt课件.ppt》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、3实验三细菌形态结构观察及革兰染色全解实验目的１掌握细菌的基本形态及特殊结构2掌握革兰染色的原理、方法、结果3掌握油镜的使用原理及使用方法实验原理G染色原理：等电点学说化学学说通透性学说实验用品1、菌种培养24h的葡萄球菌、大肠杆菌。2、染液　革兰氏染液草酸铵结晶紫染液、卢戈氏碘液、95%乙醇、稀释石炭酸复红染液。3、其他物品接种环、吸水纸、酒精灯、载玻片、显微镜、香柏油、擦镜纸、细菌标本片等。实验内容细菌的基本形态、特殊结构（示教）细菌的G染色（操作，6人/组）葡萄球菌链球菌G+球菌：肺炎球菌G+球菌：痰液中的肺炎链球菌（革兰染色

2、，×1000）肺炎链球菌电镜图G-球菌：淋球菌大肠埃希菌G-杆菌：霍乱弧菌G-弧菌：（二）、细菌特殊结构观察荚膜：肺炎球菌鞭毛：变形杆菌（周鞭毛）、霍乱弧菌（单鞭毛）芽胞：破伤风杆菌（顶端）、炭疽杆菌（中部）概念:某些细菌在其细胞壁外包绕一层粘液性物质生物学意义:1.保护细菌，与细菌致病性有关2.用于细菌的鉴别与分型肺炎链球菌荚膜荚膜荚膜：肺炎链球菌荚膜：概念：许多细菌在菌体上附有细长并呈波状弯曲的丝状物生物学意义1.鞭毛是运动器官。有鞭毛的细菌能主动运动，可通过动力试验进行细菌鉴定。2.有的细菌其鞭毛与致病性有关。3.可作为细菌分

3、类、分型的依据。鞭毛：变形杆菌（周鞭毛）鞭毛鞭毛：霍乱弧菌（单鞭毛）概念:某些细菌在一定的环境条件下，能在菌体内部形成一个圆形或卵圆形小体，是细菌的休眠形式。生物学意义1.芽胞抵抗力强，故应以杀灭芽胞作为可靠的灭菌指标。高压蒸汽灭菌法是杀灭芽孢最有效的方法。2.芽胞的抵抗力强，可在自然界中存在多年，是重要的传染源。但芽胞并不直接引起疾病，只有发芽成为繁殖体后，才能迅速大量繁殖而致病。3.鉴别细菌每种细菌形成一种类型芽胞芽孢：芽胞的大小、形状、位置等随菌种而异，有重要的鉴别意义炭疽芽胞杆菌肉毒梭菌破伤风杆菌二、革兰染色法革兰染色法是细

4、菌学中最广泛使用的一种鉴别染色法。由丹麦医师ChristianGram创立。方法是先将细菌用结晶紫染色，加媒染剂（增加染料和细胞的亲和力）媒染后，用脱色剂（乙醇）脱色，再用复染剂染色。G+菌G-菌一一半半结晶紫卢戈氏碘液95%乙醇石碳酸复红初染媒染脱色复染（一）、革兰染色原理（二）、G染色步骤与方法1、涂片制备涂片干燥固定2、染色初染（结晶紫）1min媒染（卢戈氏碘液）1min脱色（95%乙醇）30s复染（石碳酸复红）30s吸水纸吸干3、镜检（油镜下观察）每次染色后都要进行冲洗时间：一、一、半、半葡萄球菌大肠杆菌（三）、G染色结果革

5、兰氏阳性革兰氏阴性（四）、革兰染色注意事项涂片要均匀，不可太厚干燥时切勿在火焰上直烤染色时脱色最关键细流水冲洗，不要直冲涂膜涂片上积水不能太多，以免稀释染液（五）、革兰染色的意义1、鉴别细菌通过染色将细菌分为G+、G-两大类细菌2、研究与致病性的关系G+菌致病一般为外毒素G-菌致病一般为内毒素3、指导临床用药G+菌对青霉素、红霉素、头孢菌素敏感G-菌对上述药物不敏感，对链霉素、氯霉素、庆大霉素、卡那霉素等敏感（一）油镜工作原理油镜的透镜非常小。在不加油的情况下，由于空气和玻璃对光线的折射率不同，因此光线透过载玻片经过空气时发生散射，

6、很少能够进入油镜，造成物像不清。香柏油（n=1.515）的折光率与玻璃（n=1.52）相近，由于光线透入时不会因折射而减弱，因此视野明亮，物像清晰。三、显微镜油镜的使用目镜物镜载物台集光器光源镜臂粗螺旋细螺旋（二）油镜使用方法1．对光接通电源，打开显微镜上的电源开关，内置光源灯亮，并可调节亮度。使用油镜时，应将灯光调至最亮，聚光器升至最高，光栅完全打开。2．标本加油在细菌染色片的菌膜上滴加1滴香柏油，注意勿使载物台倾斜，以免镜油流淌。3．识别并转换油镜头油镜有三种标志：①放大倍数×100；②镜头下缘有一圈白线；③英文标识“oil”。

7、找到油镜，旋转物镜转换器（勿用手直接掰动镜头）使油镜头转至载物台中央。4．调焦、观察标本从侧面观察并缓慢转动粗调螺旋，使载物台上升至油镜头浸入油中并几乎与玻片接触（注意勿使两者相碰）时为止；眼睛转向目镜观察视野，并往相反方向转动粗调螺旋缓慢下降载物台，至视野中闪现标本轮廓时为止；再转换细调螺旋调节至物像清晰。若直至油镜头脱离油滴仍未看到物象，可重复以上操作。（三）油镜使用注意事项显微镜属于精密仪器，使用时需仔细小心、避免震动。调焦时切忌用力过猛、一味往一个方向调节，否则易损坏镜头或压碎标本片。油镜头用后应下降载物台，取下标本，立即用

8、擦镜纸顺一个方向擦净镜头上的油。若油已干，可在擦镜纸上滴少许二甲苯擦拭，并随即用干净的擦镜纸擦去二甲苯，以防止腐蚀镜头。标本片上、下面不要放反；看完后一定放回标本盒，不要放入消毒桶内。显微镜用后应旋转物镜转换器，将物镜转成“八”字形，