细菌鉴定中常用的生化实验.ppt

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1、实验八细菌鉴定中常用的生化实验一、实验目的掌握糖发酵试验、淀粉实验、吲哚实验、M.R.及V.P的原理及方法。掌握以上实验的用途。二、实验原理淀粉实验糖发酵实验发酵后产生的有机酸：乳酸、醋酸、丙酸等（溴甲酚紫变色范围pH5.2~6.8,pH<5.2黄色，pH>6.8紫色）发酵后产生的气体：甲烷、氢、二氧化碳等（杜氏小管内有气泡，产气漂浮）糖发酵试验现象二、实验原理M.R.及V.P实验甲基红试验是用来检测由葡萄糖产生的有机酸，如甲酸、乙酸、乳酸等。当细菌代谢糖产生酸时，培养基就会变酸，使加入培养基的甲基红指示剂由橘黄色变为红色。二、实验原理M.R.及V.P实验VP试验是用来测定某些细菌利

2、用葡萄糖产生非酸性或中性末端产物的能力，如丙酮酸。丙酮酸经缩合、脱羧后生成乙酰甲基甲醇，此化合物在碱性条件下能被空气中的氧气氧化成二乙酰。二乙酰与蛋白胨中精氨酸的胍基作用，生成红色化合物。二、实验原理吲哚实验吲哚试验是用来检测吲哚的产生。有些细菌能产生色氨酸酶，分解蛋白胨中的色氨酸产生吲哚和丙酮酸。吲哚与对二甲基氨基苯甲醛结合，形成红色的玫瑰吲哚。三、实验器材培养基1、淀粉培养基:500ml（分装于四个三角瓶，包扎，121~126℃灭菌30min）蛋白胨10g可溶性淀粉2g氯化钠5g琼脂15~20g牛肉膏5g水1000mlpH7.22、糖发酵培养基：300ml（分装于28只试管，包扎

3、，112~115℃灭菌30min）蛋白胨10g氯化钠5g葡萄糖10g水1000mlpH7.4溴甲酚紫溶液（1.6%水溶液）1ml3、M.R.及V.P实验:600ml（分装于56只试管，包扎，112~115℃灭菌30min）蛋白胨5gK2HPO45g葡萄糖5g水1000mlpH7.2~7.44、吲哚培养基:300ml（分装于28只试管，包扎，121~126℃灭菌30min）蛋白胨10g氯化钠5g水1000mlpH7.6三、实验器材菌种1、大肠杆菌2、枯草芽孢杆菌3、未知菌其他1、试管6组28个/组（每个试管带一个德汉氏小管）2、平皿2组16个/组3、三角瓶2组8个/组四、实验步骤（一）

4、准备实验器材，配制培养基（二）接种培养试验名称被接菌种1被接菌种2被接菌种3对照（管数）1.淀粉水解实验大肠杆菌枯草芽孢杆菌产气肠杆菌1支/每组不接种2.糖发酵大肠杆菌枯草芽孢杆菌产气肠杆菌1支/每组不接种3.MR试验大肠杆菌枯草芽孢杆菌产气肠杆菌1支/每组不接种4.VP试验大肠杆菌枯草芽孢杆菌产气肠杆菌1支/每组不接种5.吲哚试验大肠杆菌枯草芽孢杆菌葡萄球菌1支/每组不接种（三）结果观察葡萄糖/乳糖发酵试验，H2S产生试验直接观察。VP试验：去塞，加40％KOH15滴，振荡，再加等量α－奈酚，振荡，37℃振荡培养30min，观察。MR试验：加甲基红试剂2－3滴，观察。吲哚试验：加1

5、ml乙醚（作用是萃取出吲哚）。振荡，静止片刻使分层，沿管壁慢慢加入吲哚试剂10滴，观察。五、实验结果及分析试验名称1.淀粉水解实验2.糖发酵3.MR试验4.VP试验5.吲哚试验大肠杆菌枯草芽孢杆菌产气肠杆菌金黄色葡萄球菌对照六、思考题1、糖发酵试验中，所安装的杜氏小管起什么作用？2、V.P.试验与M.R.试验的最初作用物以及最终产物有什么异同？为什么会出现最终产物的不同。3、吲哚是细菌分解哪一种氨基酸的产物？