专题三：菊花的组织培养.ppt

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1、1958年，美国植物学家斯图尔德等人，用胡萝卜韧皮部的组织块进行离体培养，得到了完整的植株,并且能够开花结果。成熟的胡萝卜植株胡萝卜肉质根薄片胡萝卜试管苗胚状体发育离体培养专题三植物的组织培养技术快速繁殖。生产药物、食品添加剂、香料、色素、和杀虫剂等。例如：紫杉醇，生物碱、紫草素等。转基因植物的培育。培养无病毒植株。植物组织培养的意义：1、课题目标说明植物组织培养的基本原理。学习植物组织培养的基本技术，进行菊花或其他植物的组织培养。2、课题重点与难点课题重点：植物组织培养过程中使用的无菌技术。课题难点：植物组织培

2、养过程中使用的无菌技术。一、植物组织培养的基本过程1、基础知识------细胞分化：（1）细胞分化的概念：植物的个体发育过程中，细胞在形态、结构和生理功能上都会出现稳定性的差异，形成这些差异的过程叫做细胞分化。（2）植物体的个体发育，是植物细胞不断分裂、生长和分化的结果。（3）细胞分化是特定基因在一定的时间、空间选择性表达的结果。2、基础知识------细胞全能性（1）概念：生物体的细胞具有使后代细胞形成完整个体的潜能，细胞的这种特性叫做细胞的全能性。（2）细胞全能性的物质基础：生物体的每一个细胞都含有本物种所特

3、有的全套遗传物质，都有发育成完整个体所必需的全套基因。（3）高度分化的植物细胞仍然有发育成完整植株的能力。（4）动物体细胞随着分化程度的提高，细胞的全能性逐渐受到限制，分化的潜能较窄，但其细胞核仍具有全能性。例如：克隆羊等。（5）在生物体的所有细胞中，受精卵的全能性是最高的；其次是卵细胞。全能性的高低：②体细胞：植物细胞>动物细胞③分化程度低的细胞>分化程度高的细胞④幼嫩细胞>衰老的细胞⑤分裂能力强的细胞>分裂能力弱的细胞①受精卵＞生殖细胞＞体细胞（6）全能性表达的条件（植物组织培养的条件）内因：离体（离体的细胞

4、、组织或器官）外因：1）无菌2）适宜的外界环境条件，如适宜的温度、湿度、光照等3）培养基（一定的营养物质，激素）3、植物组织培养的基本过程离体的植物器官、组织或细胞愈伤组织根、芽植物体外植体A、脱分化B、再分化植物激素：细胞分裂素、生长素3、植物组织培养过程1、A过程进行有丝分裂2、B过程进行有丝分裂同时也进行分化3、A不需光照，而B需光照，叶绿素的合成需光照愈伤组织愈伤组织是通过细胞分裂形成的，其细胞排列疏松而无规则，高度液泡化呈无定形状态的薄壁细胞。1、植物材料的选择二、影响植物组织培养的因素（1）不同的植物

5、组织，培养的难易程度有很大差别；（2）同一种植物材料，因其年龄、保存时间的长短不同也会影响培养的结果。（3）一般选择植物生长旺盛的部位。菊花的组织培养，一般选择未开花植株的茎上部新萌发的侧枝。大量元素：N、P、K、Ca、Mg、S微量元素：B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、Co有机物：甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等植物激素：生长素、细胞分裂素、赤霉素等MS培养基的主要成分：2、培养基不同的离体组织和细胞对营养、环境等条件的要求相对特殊，需配置适宜的培养基。常用的一种培养基是MS培养基。MS固体培养基成分

6、及比例微生物培养基以有机营养为主。与微生物的培养不同，MS培养基则需提供大量无机营养，无机盐混合物包括植物生长必须的大量元素和微量元素两大类。思考题：同微生物培养基相比，MS培养基的配方有哪些明显的不同？MS培养基的成分及各成分的作用：3、激素配比对组织培养的影响在配制好的MS培养基中，常常需要添加植物激素。植物激素中，生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性激素。其浓度、使用的先后顺序、用量的比例等都影响实验结果。高：利于根分化、抑制芽的形成生长素/细胞分裂素低：利于芽的形成适中：利于愈伤组织的

7、形成5、消毒在培养的整个过程中，都需要是一个无菌环境4、pH、温度、光照等条件菊花：pH=5.8温度控制在18—22℃每日光照12h正常苗污染苗无菌技术是植物组织培养能否获得成功的关键。活动：尝试把菊花组织培养的操作流程给描述出来。（提示：怎样配制MS培养基?外植体消毒应如何进行?接种、培养、移栽时应注意什么问题?）三、实验操作：菊花的组织培养的实验操作：（一）制备MS培养基（注意无菌操作）（二）外植体的选择与消毒（三）接种（注意无菌技术的操作，方向）（四）培养（注意消毒和对光照的控制）（五）移栽（注意试管苗适应

8、外部环境的过程）（六）栽培实验操作（一）制备MS固体培养基1、配置各种母液2、配置培养基①定容②调PH③培养基的分装3、灭菌分装好的培养基连同其他器械一起进行高压蒸汽灭菌1、选材：菊花茎段，取生长旺盛的嫩枝（二）外植体消毒2、消毒：流水冲洗—酒精—无菌水冲洗—氯化汞—无菌水冲洗至少三次之上（三）接种用70％的酒精喷雾使空气消毒，酒精或新洁尔灭搽洗工作台并用紫外线照射20分