GBT 18647-2002 动物球虫病诊断技术

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1、GB/'r18647-2002前言球虫病(coccidiosis)是多种动物的一种重要寄生虫病，对家畜、家禽、鱼类和野生动物等均有不同程度的危害，各国均有发生。本病对家禽和兔危害较大，急性暴发的死亡率可超过3000;其次是猪、牛、羊等大家畜，急性感染常引起下痢，生长严重受阻;也偶有鱼类和野生动物发生球虫病的报道。特别在集约化的养殖中，若控制不严，会造成重大的经济损失。本病的病原为泡子虫纲(Sporozoa)，球虫亚纲(Coccidia)，艾美耳科(Eimeriidae)中的艾美耳属(Eimeria)

2、、等抱属(Isospora)、泰泽属(Tyzzeria),温扬属(Wenyonella)的球虫。每种动物都有各自特有的球虫种，文献记录畜禽和野生动物的球虫种已达1340种。国内外对球虫病诊断的经典方法是病原检查，并结合临床症状和病理剖检进行综合诊断。尽管国内外学者建立了多种免疫学和血清学技术，如色素试验法、子袍子制动反应、间接血凝试验、免疫荧光抗体试验、酶联免疫吸附试验(EIASA)、免疫细胞化学技术、随机引物扩增多态性DNA(RAPD)等，但由于这些方法检出的准确性和操作复杂等问题，尚不能代替现有

3、方法。最常用的方法仍是病原检查和综合诊断技术。病原检查简单、易行，既可定量、又可定性，既可用于发病前、又可用于发病后，以确定动物或动物群感染球虫的程度。综合诊断主要用于发病或死亡后的诊断，确定动物或动物群是否因感染球虫而发病或死亡病原检查可广泛用于流行病学调查、防治药物的筛选和临床验证、进出口检疫、无本病健康动物群的建立等。为了规范球虫与球虫病的检疫方法，使得检出结果客观、准确、一致，以保证《中华人民共和国动物防疫法》的实施，特制定本标准。本标准的附录A、附录B为标准的附录，附录C为提示的附录。本标

4、准由中华人民共和国农业部提出。本标准由全国动物检疫标准化技术委员会归口。本标准起草单位:中国农业科学院上海家畜寄生虫病研究所、中国农业科学院兰州兽医研究所。本标准主要起草人:黄兵、陈兆国、白启。中华人民共和国国家标准Gs/T18647-2002动物球虫病诊断技术Diagnostictechniquesforanimalcoccidiosis1适用范围本标准规定了动物球虫病的病原检查和综合诊断技术。本标准适用于禽类和兔的球虫病(感染)的诊断。2病原检查2.1材料准备2门1饱和盐水，配制方法见附录A(标

5、准的附录)。2.1.260目铜丝网或尼龙网、100mL量杯、50mL和100mL烧杯、5mL玻璃瓶、吸管、镊子、天平、离心机、麦氏虫卵计数板、载玻片、盖玻片、显微镜等。2-1.3被检动物或动物群的新鲜粪便不少于200g,2.2操作方法2.2门定性检查2.2.1.1取被检动物或动物群的新鲜粪便10g，放人50mL烧杯中，加人适量水。2.2.1.2轻轻搅匀，经6。目铜丝网或尼龙网过滤。2.2.1.3将滤液移人4支10mI,-15mL试管，2500r/min离心10min,22.1.4倾去上清液，各管沉淀

6、物中加人少量饱和盐水，混匀。各管的沉淀物混悬液移人一个5MI玻璃瓶。2.2.1.5用饱和盐水(见附录A功A满，盖上盖玻片(盖玻片须能与液面接触)，静置10min,2}2.1.6取下盖玻片，放在载玻片上。2.2.1.7置载玻片于显微镜台上，用10X10或10X40的倍数进行检查。2.2.1.8判定:a)发现球虫卵囊，判为阳性，说明该动物(群)已感染球虫，并可根据附录C(提示的附录)卵囊形态特征，初步确定为哪一属的球虫;b)未发现球虫卵囊，需重复检查5次，仍未见球虫卵囊，本粪样可判为阴性。只有连续检查粪

7、便7d-10d，均未发现球虫卵囊，方可说明该动物(群)未感染球虫。2.2.2定量检查22.2.1对定性检查中呈阳性的粪样，要进行定量检查。2.2-2.2取待检粪样2g，放人50mL烧杯。2.2.2.3加人少量自来水搅匀，经60目铜丝网或尼龙网过滤，并用自来水冲洗几次滤网。22.2.4滤液经2500r/min离心10mina2.2-2.5用少量饱和盐水将沉淀物搅匀，移人100mL量杯，加饱和盐水至60ml处，充分混匀。2.2.2.6用吸管吸取混悬液注满麦氏虫卵计数板，静置5min,22.2.7将麦氏虫

8、卵计数板置于显微镜下检查，用10X10或10X40倍，数出每个刻室(1cmx1:Mx中华人民共和国国家质i监督检验检疫总局2002-02-19批准2002-05-01实施GB/T18647-20020.15cm=0.15cm'，含10。个小方格)内的所有卵囊数，计算出平均值A。对压线的卵囊，按左、上压线计，右、下压线不计处理。22.2.8每克粪便卵囊数(OPG)按式(1)计算:OPG=(A令0.15)X60一2=AX200····················一(1