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1、羊球虫病诊断技术规程1范围本标准规定了羊球虫病的病原检杏、病理检杏与结果判定。本标准适用于我省羊球虫病的诊断。2病原检查2.1材料准备2.1.1饱和食盐水溶液、0.01mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.4）o2.1.2显微镜、麦克马斯特计数板、离心机、电子天平、50mL离心管、玻璃棒、60冃铜筛、尼龙网、50讥烧杯、100mL量杯、载玻片、盖玻片、吸管、手术刀、解剖刀等。2.2粪样检查2.2.1清辰从疑似球虫感染的待检羊直肠屮采取新鲜粪样（10〜30）g,放干净容器内冷藏备用。每份粪样应附送粪卡，送粪卡应
2、记录羊场名称、畜别、畜号、性别、年龄、有无孕、采粪日期等。送检验室待检。2.2.2取粪样3g,置于50mL的烧杯中，加入少量清水，用玻璃棒将粪样捣碎，加入约为粪样10倍聚的清水，搅拌均匀，用60口铜筛过滤于另一干净烧杯内，将过滤好的滤液分别加入50mL离心管中，2000r/min离心lOmin,倾去上清液,在沉淀物中加入饱和食盐水溶液至45mL,混匀,2000r/min离心lOmino将上清液分装至四个（10〜15）mL的试管屮，加饱和食盐水溶液至液面微高出管口，取盖玻片轻压于液面，静置10mine将盖
3、玻片垂直提起，放在载玻片上，置于显微镜下检查。2.3病变部位检查解剖疑似球虫感染的病、死羊，分别对羊的皱胃、肠道、肝脏及胆管等冇明显病变的部位取样，进行裂殖子或卵囊检查。2.3.1裂殖子检查取皱胃、肠道、胆管病变部位，用0.01mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.4）轻轻洗去表层朵物。用解剖刀或手术刀刮取少许病变处粘膜，置丁•干净载玻片上，滴（1〜2）滴0.01mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.4）,加盖玻片，置于显微镜F检查。2.3.2卵囊检查2.3.2.1将病变的皴胃、肠道、胆管或胆囊，纵向剪开。取少量内
4、容物，置于载玻片上，滴（1〜2）滴0.01mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.4）,加盖玻片，轻轻将内容物压散，置显微镜下检查；从冇黄白色坏死灶的肝脏上，剪取少量病变组织，放研钵内，加适量0.01mol/L磷酸盐缓冲液（PH7.4）,充分研磨。取1滴研磨液滴在载玻片上，加盖玻片，在显微镜下检查。DB43/T904—20142.3.2.2羊球虫卵囊形态特征参见附录A。2.4卵囊计数对检查发现羊球虫的粪样，应进行定量检查。取待检粪样2g,放入50mL烧杯。加入少量清水搅匀，经60目铜筛或尼龙网过滤,并用清水冲洗
5、几次滤网。滤液经2000r/min离心10min。倾去上清液，用少量饱和食盐水溶液将沉淀物搅匀，移入100皿量杯，加饱和食盐水溶液至50mL处，充分混匀。用吸管吸取混悬液注满麦克马斯特计数板，静置5min,在显微镜下检查，数出每个计数室内的所有卵囊数，计算出平均值A。对压线的卵囊，按左、上压线计，右、下压线不计处理。2.4.1每克粪样卵囊数(0PG)按公式计算:0PG=(A4-0.15)X60*2二AX2002.4.2对卵囊数较多的粪样，可在50mL的基础上，用饱和食盐水溶液再稀释B倍后计数，则OPG按
6、公式计算：0PG=AX200XB2.5检查结果在显微镜下观察是否有球虫卵囊、裂殖体和裂殖子。3病理检查3.1病变检查3.1.1切开腹腔，分别对羊的皴胃、小肠两端用实线进行双重结扎，取出全部小肠及皱胃。用剪刀纵向剪开小肠及皱胃，除去内容物，用0.01mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.4)冲洗肠壁和胃壁。观察胃壁及肠壁病变情况，并做好记录。3.1.2切开腹腔，切断肝叶周围韧带，结扎血管。取出完整肝脏及胆囊。剪开胆囊壁及胆管，用0.01mol/L磷酸盐缓冲液5II7.4)清洗肝脏表面及胆囊，观察病变情况并做好记
7、录。3.2检查结果3.3.1皱胃病变：皱胃胃壁呈弥漫性增厚并伴有水肿，胃粘膜表面有口色结节和红黑色出血斑。3.3.2肠道病变：十二指肠和回肠冇卡他性炎症，冇点状或带状出血，小肠及大肠的浆膜和粘膜上冇溃疡灶，并伴有黄白色结节突出于粘膜表面。3.3.3肝脏及胆囊、胆管病变：肝脏表而有大量不规则黃白色坏死灶，胆囊壁增厚，胆管明显可见,管壁增厚。4结果判定4.1病原检杏如见有人量球虫卵囊、裂殖体、裂殖了，病理检杏出现一处或多处相应病变即判可为羊球虫病阳性。当0P010X104,判定为严重感染;当10X104M0
8、PGM1X104,判定为中度感染；当0PGV1X104,判定为轻度感染。4.2粪样一样3检，均未发现球虫卵囊；肠道、肝脏、胆囊及胆管检查未发现球虫卵囊、裂殖了，各部位均未出现相应病变，即可判定为羊球虫病阴性。附录A（资料性附录）羊球虫卵囊形态特征羊球虫卵囊具有以下主要形态特征：a）球虫卵囊呈椭圆形、圆形、卵圆形或梨形等形态，均有卵囊壁。b）未发育成熟的卵囊，其颗粒状的原牛质多呈圆形，位于卵囊屮间。c）发育成熟的卵囊因属不同，而内含的他子囊和
