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时间:2020-12-23
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1、…………………………………………………………最新精品资料推荐……………………………………………………项目三食品中霉菌和酵母菌计数一、实验目的1.掌握测定霉菌和酵母菌的方法和技能2.熟练无菌操作技术。二、实验原理酵母菌是真菌中的一大类,通常是单细胞,呈圆形,卵圆形、腊肠形或杆状。 霉菌也是真菌,能够形成疏松的绒毛状的菌丝体的真菌称为霉菌。霉菌和酵母广泛分布于自然界并可作为食品中正常菌相的一部分。霉菌和酵母也可造成中腐败变质。由于它们生长缓慢和竞争能力不强,故常常在不适于细菌生长的食品中出现,这些食品是pH低、湿度低、含盐和含糖高的食品、低温贮藏的食品,含有抗菌素的
2、食品等。由于霉菌和酵母能抵抗热、冷冻,以及抗菌素和辐照等贮藏及保藏技术,它们能转换某些不利于细菌的物质,而促进致病细菌的生长;有些霉菌能够合成有毒代谢产物-霉菌毒素。霉菌和酵母往往使食品表面失去色、香、味。例如,酵母在新鲜的和加工的食品中繁殖,可使食品发生难闻的异味,它还可以使液体发生混浊,产生气泡,形成薄膜,改变颜色及散发不正常的气味等。因此霉菌和酵母也作为评价食品卫生质量的指示菌,并以霉菌和酵母计数来制定食品被污染的程度。目前已有若干个国家制订了某些食品的霉菌和酵母限量标准。我国已制订了一些食品中霉菌和酵母的限量标准。霉菌和酵母菌的测定是指食品检样经过处理,在
3、一定条件培养后,所得1g或1ml检样中霉菌和酵母菌菌落数。三、设备和材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,其他设备和材料如下: 冰箱 恒温培养箱 均质器 恒温振荡器 显微镜 电子天平无菌锥形瓶 无菌广口瓶 无菌吸管 无菌平皿 无菌试管 无菌牛皮纸袋、塑料袋 培养基和试剂 马铃薯葡萄糖…………………………………………………………最新精品资料推荐……………………………………………………6…………………………………………………………最新精品资料推荐……………………………………………………琼脂培养基 孟加拉红培养基: 4 检验程序 霉菌和酵母计数的检验程序见图1。
4、 5 操作步骤 5.1 样品的稀释 5.1.1 固体和半固体样品:称取25g样品至盛有225mL灭菌蒸馏水的锥形瓶中,充分振摇,即为1∶10 稀释液。或放入盛有225mL无菌蒸馏水的均质袋中,用拍击式均质器拍打2min,制成1∶10的样品 匀液。 5.1.2 液体样品:以无菌吸管吸取25mL样品至盛有225mL无菌蒸馏水的锥形瓶(可在瓶内预置适 当数量的无菌玻璃珠)中,充分混匀,制成1∶10的样品匀液。 5.1.3 取1mL1∶10稀释液注入含有9mL无菌水的试管中,另换一支1mL无菌吸管反复吹吸,此液为1∶100稀释液。图1 霉菌和酵母计数的检验程序 5.1.4
5、 按5.1.3操作程序,制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次,换用1次1mL无菌吸管。 5.1.5 根据对样品污染状况的估计,选择2个~3个适宜稀释度的样品匀液(液体样品可包括原液), 在进行10倍递增稀释的同时,每个稀释度分别吸取1mL样品匀液于2个无菌平皿内。同时分别取 1mL样品稀释液加入2个无菌平皿作空白对照。 5.1.6 及时将15mL~20mL冷却至46℃的马铃薯葡萄糖琼脂或孟加拉红培养基(可放置于 46℃±1℃恒温水浴箱中保温)倾注平皿,并转动平皿使其混合均匀。 5.2 培养 待琼脂凝固后,将平板倒置,28℃±1℃…………………………………
6、………………………最新精品资料推荐……………………………………………………6…………………………………………………………最新精品资料推荐……………………………………………………培养5d,观察并记录。 5.3 菌落计数 肉眼观察,必要时可用放大镜,记录各稀释倍数和相应的霉菌和酵母数。以菌落形成单位(colonyformingunits,CFU)表示。 选取菌落数在10CFU~150CFU的平板,根据菌落形态分别计数霉菌和酵母数。霉菌蔓延生长 覆盖整个平板的可记录为多不可计。菌落数应采用两个平板的平均数。 6 结果与报告 6.1 计算两个平板菌落数的平均值,再将平均值
7、乘以相应稀释倍数计算。 6.1.2 若所有平板上菌落数均大于150CFU,则对稀释度最高的平板进行计数,其他平板可记录为多 不可计,结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。 6.1.3 若所有平板上菌落数均小于10CFU,则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。 6.1.4 若所有稀释度平板均无菌落生长,则以小于1乘以最低稀释倍数计算;如为原液,则以小于1 计数。 6.2 报告 6.2.1 菌落数在100以内时,按“四舍五入”原则修约,采用两位有效数字报告。6.2.2 菌落数大于或等于100时,前3位数字采用“四舍五入”原则修约后,取前2位数字,后面用0代 替
8、位数来表示
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