肿瘤转移新进展和机制ppt课件.ppt

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1、肿瘤转移新进展传统认识早期肿瘤肿瘤增大并且生成血管和淋巴管淋巴管肿瘤细胞挤入血管和淋巴管中通过血液通过淋巴循环系统中的肿瘤细胞肿瘤细胞早期转移肝细胞肿瘤黏附于血管壁并且通过血管壁进入血管以形成远处转移淋巴结转移灶淋巴结肿瘤细胞从原发灶脱落进入循环系统，这种情形发生在大多数肿瘤中并在肿瘤形成的早期阶段即可发生。然而，只有少数播散的肿瘤细胞能够形成可见转移病灶。血管壁的紧密连接、远处脏器非适宜环境及以正常器官对入侵肿瘤细胞营养供给的限制是转移灶形成的障碍之一。新生血管的不完整性使得肿瘤细胞得以进入的循环系统。这种不完整性是否也有利

2、于循环肿瘤细胞从循环中回归？肿瘤细胞不需要进一步的适应原发肿瘤微环境便能够进入活跃状态。肿瘤转移是否涉及自身的种植转移？TumorSelf-SeedingbyCirculatingCancerCells我们一直认为癌细胞离开原发肿瘤转移到远处脏器是一个单向的过程。最新研究表明，循环肿瘤细胞(CirculatingCancerCells,CTCs）也能够移居到原发肿瘤，这个过程称之为“肿瘤自种植（TumorSelf-Seeding）”。霍华德休斯医学研究所斯隆-凯特琳癌症中心肿瘤生物学和遗传学项目TumorSelf-Seedin

3、gbyCirculatingCancerCells.Cell.2009Dec24;139(7):1315-26.新进展TumorSelf-SeedingbyCirculatingCancerCells一.“TumorSelf-Seeding”现象是否存在？一、“self-seeding”现象1.将标记GFP-荧光素酶的MDA231-LM2（人乳腺癌肺转移细胞亚群）接种于小鼠的一侧乳腺，构建—“释放”瘤体2.将未标记细胞接种于对侧乳腺，构建—“接受”瘤体3.60天后将“接受”瘤体切除，并应用体外生物发光成像技术检测瘤体是否存在标

4、记的肿瘤细胞。发现在85%的“接受”瘤体内能够检测到标记的肿瘤细胞。荧光显微镜下观察“接受”瘤体的冰冻切片RT-PCR检测在“接受”瘤体内含荧光标记mRNA肿瘤细胞约占整个瘤体细胞数的5%-30%。现象的普遍性与空白对照组比较转移灶播散的肿瘤细胞能否侵入到“接受”瘤体内？首先将荧光标记的肿瘤细胞由尾静脉注入小鼠体内，确定形成肺内转移瘤后，在小鼠乳腺建立“接受”瘤体模型。10/11(91%)小鼠“接受”瘤体内发现荧光标记肿瘤细胞循环肿瘤细胞的含量与自我种植肿瘤细胞的含量呈正比TumorSelf-SeedingbyCirculat

5、ingCancerCells一.“TumorSelf-Seeding”现象是否存在？存在二.在肿瘤细胞群体中，哪一细胞亚群来完成“TumorSelf-Seeding”？SW620,A375,MDA231：祖代细胞vs转移性细胞亚群转移性细胞亚群自我种植能力为祖代细胞的8-35倍！自种植肿瘤细胞亚群分析人乳腺癌细胞株MDA231人黑色素瘤细胞株A375从一侧乳腺“释放”瘤体种植到对侧乳腺“接受”瘤体的能力比较。＞100倍从血液循环中种植到“接受”瘤体能力比较。6倍穿血管内皮层迁徙能力比较。4-6倍S1代细胞基因特征基因表型特征与

6、动物实验结果相吻合TumorSelf-SeedingbyCirculatingCancerCells一.“TumorSelf-Seeding”现象是否存在？存在二.在肿瘤细胞群体中，哪一细胞亚群来完成“TumorSelf-Seeding”？S1代三.“TumorSelf-Seeding”是如何实现的？具体机制？三、“self-seeding”机制研究初步机制1.构建小鼠乳腺肿瘤模型（“接受”瘤体、未作标记）。2.10天后经左心室注射表达LacZ/GFP/luciferase的MDA231“循环细胞”。3.LacZ基因是大肠杆菌

7、乳糖操纵子中的一个基因，LacZ基因编码的beta--半乳糖苷酶，可催化乳糖的水解。Beta-gal比较稳定，用X-Gal(5-N-4-氯-3-u2115,tt–beta--半乳糖普）为底物进行染色时，呈蓝色。1.注射肿瘤细胞后其立即在体内广泛分布。0-7天逐渐清除，从7天开始仅在“接受”瘤体内局限分布。42天图，标记肿瘤细胞在“接受”瘤体内，而模拟接种组的乳腺内无种植。瘤体因素4.转移性细胞株比其祖代细胞更具种植于“接受”瘤体的能力。循环肿瘤细胞因素1.“接受”瘤体的因素推论与假设2.循环肿瘤细胞的因素吸引循环肿瘤细胞？响应

8、“吸引”浸透瘤体？条件培养基：肿瘤细胞生长过的培养基正常细胞生长过的培养基实验验证---穿血管内皮迁移试验与正常细胞条件培养基相比，在肿瘤细胞条件培养基条件下循环肿瘤细胞更容易实现穿血管内皮迁移。实验验证---穿血管内皮迁移试验肿瘤条件培养基：祖代肿瘤细胞条件培养基转移性亚群