GE离子交换层析柱-protocol.docx

《GE离子交换层析柱-protocol.docx》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、GE离子交换层析柱protocol5ml（举例子）Preparation1.Buffer:（pH根据蛋白的pI进行调整，pH尽量远离pI。pH>pI,过Q柱；pH>pI,过S柱）A:50mMTris-HClpH8.0B:50mMTris-HClpH8.01MNaCl0.22um过滤除杂质，4℃静置过夜除气泡。2.Protein:用0.22um滤器过滤除质；或者分装于1.5mlEP管，14000rpm，4℃离心20min，去除沉淀。3.Prepareenoughtubes有流速时，禁止将泵的探头暴露到空气中!!!柱子在仪器上时，无论何时均要限压!!!Proced

2、ure1打开仪器总开关，电脑。检查：泵的探头是否放入纯水中。洗泵：Manual--pump--pumpbasicwash--Aon,Bon--insert--execute洗系统：Manual--pump--flow--10ml/min--insert--executeManual--other--Endtime--volume--40ml2安装柱子给流速：Manual--pump--flow--3ml/min--insert--execute(仪器显示系统压力为*Mpa)限压力：Manual--Alarms--Alarmspressure--(0.3+*)M

3、pa--insert--execute(0.3Mpa是HitrapQ柱子的最大限压)装柱子：先装上面，再下面，装完后用纸巾擦干，观察是否漏液。3清洗柱子限压力：Manual--Alarms--Alarmspressure--(0.3+*)Mpa--insert--execute给流速：Manual--pump--flow--1ml/min--insert--execute（低流速下装柱子）Manual--other--Endtime--volume--10ml（第一次使用的新柱子或者装有乙醇的柱子，必须先用纯水洗1.5CV以上。CV：柱体积，其中HitrapQ

4、HP5ml的CV是5ml）停流速：End装溶液：将A泵放入bufferA,将B泵放入bufferB。（必须在零流速下操作）限压力：Manual--Alarms--Alarmspressure--(0.3+*)Mpa--insert--execute低盐洗：Manual--pump--gradient--0%B--insert--executeManual--pump--flow--3ml/min--insert--execute清洗至基线走平（大约需要20ml）高盐洗：Manual--pump--gradient--100%B--insert--execute

5、Manual--pump--flow--3ml/min--insert--execute清洗至基线走到平低盐洗：Manual--pump--gradient--0%B--insert--executeManual--pump--flow--3ml/min--insert--execute清洗至基线走平停流速：End4上样品选择合适的上样环，例如5mlloop.用纯水清洗loop三次，再用bufferA清洗loop三次，赶走气泡；同时清洗上样口。将样品置于上样口，用针筒抽吸样品进入loop。（切忌吸入气泡）5运行程序File--设定的程序--showdetail

6、--确认无误--START。特别注意更改压力，上样量大小。6清洗柱子（同3）限压力（勿忘）--低盐洗--高盐洗--低盐洗最后还要用水洗柱子。停流速：End装溶液：将A泵，B泵用水清洗后，放入纯水中。（必须在零流速下操作）水洗：Manual--pump—gradient--0%B--insert--executeManual--pump--flow--3ml/min--insert--execute清洗至基线走平7卸柱子限压力：Manual--Alarms--Alarmspressure--(0.3+*)Mpa--insert--execute(0.3Mpa是H

7、itrapQ柱子的最大限压，*：系统压力)给流速：Manual--pump--flow--1ml/min--insert--execute卸柱子：先卸下面，再卸上面，卸下的柱子置于4℃保存。（低流速下卸柱子）