层析柱装柱流程.doc

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1、层析柱装柱流程装柱材料层析柱：BXK层析柱装柱仪器：ÄKTA装柱器装柱溶液20%乙醇匀浆的准备精确计算所需介质的量（这对固定柱高的层析柱尤其重要）。1L填充柱所需的介质量大约是1.15L自然沉淀匀浆的量，于干净烧杯中，取100%沉降胶（静止放置一天以上，倾去20%乙醇后的胶为100%沉降胶）与等体积20%乙醇混合备用。安装层析柱1. 检测层析柱的各个部件，确保干净、完整，拧上下端堵头，拧紧膨胀圈，然后将层析柱垂直固定在铁架台上。2. 将装柱器安装在层析柱上端。3. 往层析柱中加入适量的20%乙醇，打开下端口，重力流，排除下筛网中滞留的气泡，在液面低至1-2cm高度时关闭层析柱下端出口。装柱1.

2、 用玻璃棒紧靠柱子内壁引流，将摇匀的介质加入到层析柱中，这可以减少气泡的产生。迅速用20%乙醇填满柱子和装柱器，装上装柱器盖子，连接到ÄKTA上。2. 打开层析柱下端，开始以30cm/h流速装柱，直至柱床界面平稳。停止装柱。3. 打开装柱器盖子，用虹吸法去除界面上端的液体，去掉装柱器，然后小心的用20%乙醇封满柱子剩余部分。4. 将上端转接头一端连上ÄKTA，打开机器，以装柱流速用装柱液排出转接头管路中及筛板中残留的气泡，然后将转接头另一端装到层析柱上，使转接头下端刚好接触胶界面。(装柱流速约为70-100%的最大流速）5. 拧紧膨胀圈，继续用装柱流速压柱，至少保持3个柱体积，以界面不变为主，

3、在界面处做上记号。6. 关闭泵，并关闭柱子下端出口，使层析柱上端和泵断开（转接器上接口是打开的），略拧松膨胀圈，缓慢向下转动调节杆，到记号处停止，然后再拧紧膨胀圈，关闭上接口。7.检测柱效