bpg层析柱标准装柱流程规范

《bpg层析柱标准装柱流程规范》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、操作标准冃的：为了使BPG300层析柱装柱过程可重复，并能够得到较好的柱效，故建立此操作规范。范围：配合AKTAprocess系统进行有效的蛋白质纯化操作。责任人：层析工序操作人员标准操作程序：1基本术语概念填料因子（PackingFactor，PF）:指在在装柱过程中，用低流速（如60cm/h）对填料进行沉降压缩得到的调料高度和最后装柱完成时填料高度（柱高）的比值，GEHC生产的各种常见填料的PF参见《GEHCAxiChrom300-1000columnsUserManual28-9562-89EditionAA》；pa

2、ckingfactorPF=(consolidatedbedheight}/(packedbedheight}ThePackingFactortakesthesettlingspeedofmediaintoaccount.TheCompressionFactor(CF)sdefinedastheratiowhennoflowthroughthebedisapplied.compressionfactorCF=(gravitysettledtedheight)/(packedbedheight)Thereisadiffere

3、ncebetweenPackingFactorandCompressionFactor.ThedefinitionofPackingFactorinvolvesflowthroughthebedwhichinsomecasesleadstoamorecompressedbedandlowerconsolidatedbedheight,whileinothercasesthegravitysettledbedheightislowersincethebedpacksmoredenselyifgivenmoretimetodo

4、so.MabselectSuRe™,forexample,hasasignificantlylowergravitysettledheightthanitsconsolidatedheightandthishastobeconsideredwhencalculatingtheamountofmediatobepackedinthecolumn.线性流速(linearflowrate):中.位时间内液体流经的直线距离，常用cm/h表示；体积流速(volumeflowrate):革位时间内液体流经的空间容釈，常用ml/min表

5、示；换算:ml钱性JiSJ®体和流速=6Llx柱横截面面积2准备工作2.1检查层析柱的完整性，所带配件，是否水平（用水平仪矫正），是否清洁（如有污染应进行淸洗）。2.2确定所用填料及其特性、浓度等以DEAESepharoseFastFlow填料为例，其填料因子（PF）为1.15,新填料（slurry）浓度为75%（保存于20%乙醇屮），耐压3bar。2.3确定放大后的工艺参数以XX生化制药股份有限公司的放大工艺为例，屮试工艺参数：柱高h=10cm；体积流速vl=3ml/min；柱内径d=1.6cm.即，线性流速v2=vl/

6、s柱=3/（3.14x0.82）cm/min=1.5cm/min；样品与填料接触时间t=h/v2=10/1.5min=6.67min；在工艺的线性放大中h、v2和t均不变，则可保证样品出峰的位置（洗脱吋间）和形状不变。使用BPG300层析柱进行放大的工艺参数：装柱体积V林=Stth=3.14xl.52xlL=7L；装柱需要slurry体积Vslurry=V柱xPF/Cslurry以DEAESepharoseFastFlow为填料，则，VslurTy=7x1.15/0.75L=10.73L；装入柱中的slurry高度LS

7、U

8、rry=Vsiurry/S10.73/（3.14x1.52）dm=1.52dm=15.2cm.3管路安装3.1层析柱管道和配件安装3.1.1卸下柱子顶部和底部的盲堵垫圈，旋松密封调节器，用纯水或20%乙醇充分浸润柱内壁和柱头O型圈；3.1.2用扳手对称卸下支持杆连接到法兰的螺丝，并通过旋转高度调节手柄将柱头旋至最高处，在柱头顶部依次安装压力表和四路二通阀，在柱底安装四路二通阀；3.1.3在顶部四路二通阀上横向连接一根细管，另一端连至AKTAprocess上端连接口COLUMNTOP,同时从柱底四路二通阀横向接出一根细管至A

9、KTAprocess的卜端连接口COLUMNBOTTOM。图1、BPG300层析柱安装示意图Table1Overviewerf6P6columnsPedhotgMkwrtVdum*(I)ColumiDMmcMorColumnAreak饞•)Columntem)MinMax1Kickingwith•Mto