微生物实验课件：细菌接种和药敏实验,肠道致病菌示教.ppt

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1、一、细菌接种二、药敏实验三、肠道致病菌示教实验内容一、细菌接种目的要求：掌握细菌的接种技术、培养方法。接种方法：分离培养：平板分区划线接种纯培养：斜面接种、液体接种、半固体接种实验材料：混合菌液、纯培养细菌等。1区4区3区2区烧接种环平板分区划线接种目的：分离细菌实验方法：1区接种2区接种3区接种4区接种标记，37℃，24h。实验结果：单个菌落描述（大小，形态，边缘，表面，颜色，透明度）平板分区划线接种液体接种目的：增殖细菌实验方法：1、接种环烧灼灭菌，取菌；2、培养管去塞，倾斜；3、接种环在上液面靠近管壁处研磨；4、塞上塞子

2、，标记，37℃培养24h。液体接种实验结果：表面生长或均匀混浊生长或沉淀生长表面生长均匀混浊生长沉淀生长目的：增殖细菌和保存细菌斜面接种实验结果：均匀一致的菌苔实验方法：1、接种环烧灼灭菌，取菌；2、培养管去塞，倾斜；3、接种环从斜面底部向上划直线；4、围绕直线从下向上划蛇形曲线；5、塞上塞子，标记，37℃培养24h。目的：鉴定细菌有无鞭毛（动力实验）半固体接种实验方法：1、接种针烧灼灭菌，取菌；2、培养管去塞；3、接种针从培养基表面中央垂直插入，离管底1-2cm；4、接种针原路返回；5、塞上塞子，标记，37℃培养24h。结果

3、•生长现象–仅沿穿刺线生长（动力试验-）–向四周扩散（动力试验+）平板分区划线(金大混合菌)每人一个斜面接种（金/大）两人一支液体接种（金/大）两人一支半固体穿刺（大/痢）两人一支二、药敏实验1、实验原理将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸收琼脂中水分溶解后不断向纸片周围扩散形成递减的浓度梯度，在纸片周围抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑制，从而形成无菌生长的透明圈即为抑菌圈。抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度。二、药敏实验2、实验材料（1）金黄色葡萄球菌、大肠杆菌纯培养物；（2）分别含

4、阿米卡星、先锋霉素、氟哌酸、四环素、青霉素的纸片；（3）接种环等。二.药敏实验3、实验方法细菌接种用灭菌接种环取一菌种密集划线于琼脂平板表面（可重复来回划线）。贴纸片用无菌镊子将各种抗菌药物纸片，分别帖于培养基表面，各片距离要相等；37℃培养24h。丁庆V氟青二、药敏实验4、实验结果根据抑菌圈直径大小，来判断该菌对药物的敏感程度。分为高度敏感（>15mm），中度敏感（10－15mm），低度敏感（6－10mm），和不敏感（<6mm）。三、肠道致病菌示教单糖发酵试验(葡萄糖,甘露醇和乳糖)靛基质(吲哚)试验硫化氢试验尿素分解试验（

5、一）生化反应糖发酵试验原理:多糖－→酸性产物(或产酸产气)－→pH↓－→指示剂变色(若产气,有气泡出现)培养基：葡萄糖,乳糖,甘露醇发酵管(含溴甲酚紫)方法:接种细菌,37℃培养18-24h结果:紫色(-),黄色(+)靛基质试验原理：细菌色氨酸酶分解蛋白胨中的色氨酸，生成靛基质（吲哚），靛基质与试剂对二甲基氨基苯甲醛作用，生成玫瑰色靛基质。培养基：蛋白胨水试剂：靛基质试剂（含对二甲基氨基苯甲醛）方法:接种细菌,37℃培养18-24h,沿管壁加入2-3滴靛基质试剂(勿摇动)结果：玫瑰红色液面(+)培养基液面为黄色(-)靛基质试验

6、原理：细菌分解蛋白质中的含硫氨基酸，生成硫化氢，硫化氢与培养基中的铁盐或铅盐结合生成黑色络合物。培养基：含硫酸亚铁或醋酸铅的培养基方法:接种细菌,37℃培养18-24h结果：培养基变黑(+)，不变黑(-)硫化氢试验原理：产生脲酶的细菌，能水解尿素生成氨和CO2，氨使培养基呈碱性变色。培养基：尿素培养基(含酚红指示剂)方法:接种细菌,37℃培养18-24h结果：培养基紫红(+)培养基不变色(-)尿素分解试验