《肠道细菌实验》PPT课件

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1、第四次实验课内容1、细菌代谢产物检查（示教）2、肠道杆菌在选择鉴别培养基的生长情况（示教）SS平板、双糖铁培养基3、肥达试验（结果示教）实验一细菌代谢产物检查细菌具有不同的代谢酶系统，因此对营养物质的利用与分解能力也各不相同，可形成不同的中间代谢产物与终末代谢产物。根据细菌的代谢能力及其产物不同鉴别细菌，称为细菌的生化反应。本实验通过介绍常用生化反应的经典试验方法，以了解细菌生化反应的机制与实验原理。原理：染色镜检普通琼脂平板中菌落的形态不能鉴别能够鉴别实验一细菌代谢产物检查细菌代谢产物分解代谢产物合成代谢产物生

2、化反应?细菌菌落的色素观察金黄色葡萄球菌：产生只局限于菌落的脂溶性金黄色色素。铜绿假单胞菌：产生带荧光的水溶性色素，该色素可扩散至菌落周围，使培养基呈亮绿色。金黄色葡萄球菌铜绿假单胞菌细菌菌落的溶血现象观察乙型溶血性链球菌:透明的无色溶血环。一、糖发酵试验1.了解糖发酵的原理和在肠道细菌鉴定中的重要作用。2.掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。基本原理糖发酵试验是最常用的生化反应，在肠道细菌的鉴定上尤为重要。绝大多数细菌都能利用糖类作为碳源和能源，但是它们在分解糖的能力上有很大的差异，有些细菌能分解某种糖并产酸（

3、如乳酸、醋酸、丙酸等）和气体（如氢、甲烷、二氧化碳等）；有些细菌只产酸不产气。例如大肠杆菌能分解乳糖和葡萄糖产酸并产气；痢疾杆菌能分解葡萄糖产酸不产气，不能分解乳糖；乙型副伤寒杆菌分解葡萄糖产酸产气，不能分解乳糖。基本原理酸的产生可利用指示剂来断定。在配制培养基时预先加入溴甲酚紫[Ph5.2（黄色）-6.8（紫色）]，当发酵产酸时，可使培养基由紫色变为黄色。气体的产生可由发酵管中倒置的德汉氏小管中有无气泡来证明。糖发酵试验：乳糖乳酸乳糖酶葡萄糖发酵试验：细菌葡萄糖丙酮酸各种酸类甲酸H2+CO2脱氢酶四、操作步骤1

4、、编号用记号笔在各试管上分别标明发酵培养基名称和所接种的菌名。2、接种取盛有葡萄糖发酵培养基的试管3支，分别接种大肠杆菌、痢疾杆菌、乙型副伤寒杆菌。另取乳糖发酵培养基试管3支，分别接种这三种细菌。3．将上述已接种的葡萄糖和乳糖发酵试管和对照管置37℃温室中培养24小时。图1糖类发酵试验观察结果:观察结果时，看各管颜色变化及杜氏小管有无气泡。产酸产气用“⊕”表示；只产酸不产气用“+”表示；不产酸也不产气用“—”表示。二、靛基质（吲哚）产生试验(I)原理：分解蛋白胨内的色氨酸形成靛基质（无色）靛基质与靛基质试剂中的对

5、二甲基氨基苯甲醛结合而显红色(玫瑰吲哚)材料：蛋白胨水培养基（氯化钠、蛋白胨、蒸馏水）方法：约0.3ml的靛基质试剂徐徐加入细菌蛋白胨水培养物注：加入吲哚试剂后切勿摇晃结果：大肠杆菌(﹢)红色痢疾杆菌(﹣)黄色乙型副伤寒杆菌(﹣)黄色红色吲哚大肠杆菌产气杆菌分解六、硫化氢产生试验原理：材料：醋酸铅培养基（普通琼脂培养基、硫代硫酸钠溶液、醋酸铅溶液）含硫氨基酸硫化氢遇铅盐或亚铁盐黑褐色沉淀方法：结果：乙型副伤寒，黑褐色——＋大肠埃希菌，不变色——－乙型副伤寒大肠杆菌对蛋白质的发酵吲哚试验硫化氢试验对糖的发酵糖发酵试

6、验甲基红试验VP试验其他枸橼酸盐利用试验（21）半固体培养基(动力试验)大肠埃希菌志贺菌伤寒沙门菌材料：1、EMB培养基、SS琼脂平板、双糖铁培养基2、大肠埃希菌、伤寒沙门菌、志贺菌选择培养基肠道杆菌在选择鉴别培养基的生长情况鉴别培养基SS培养基（SalmonellaShigellaAgarMedium）SS平板基质肉汤基础培养基抑制物胆盐、煌绿、枸橼酸钠、硫代硫酸钠底物乳糖指示剂中性红pH（6.8—8.0）碱性→黄色酸性→红色菌落持点＋为粉红色菌落－为无色半透明菌落抑制作用抑制大肠杆菌及G＋菌用途分离沙门菌和志

7、贺菌属的强选择培养基原理：（SS平板）非致病菌：致病菌：胆盐分解乳糖乳酸胆酸中心浑浊的粉红色菌落不分解乳糖，菌落呈透明无色；枸橼酸铁能指示硫化氢的产生，使菌落中心呈黑色注意：非致病菌并非被杀灭，故挑病原菌菌落时，尽量挑取菌落中心部分大肠埃希菌痢疾志贺菌大肠埃希菌与伤寒沙门菌双糖铁培养基（DoublesugarIronMedium）成分含酚红指示剂的pH7.6的蛋白胨水500mL琼脂(1.3%)6.5g乳糖(1%)5g葡萄糖(0.1%)0.5g硫酸亚铁铵(0.02%)0.1g硫代硫酸钠(0.02%)0.1g用途初步

8、鉴别肠道杆菌原理：只分解葡萄糖：产少量酸上层培养基的酸+O2→CO2+H2O蛋白胨代谢产物下层培养基不接触空气→培养基呈酸性→显黄色葡萄糖、乳糖都分解硫酸亚铁铵：用以检查细菌分解蛋白质后是否产生硫化氢。只产酸产酸&产气培养基略变碱指示剂变红肠道杆菌的生长结果SS双糖铁大肠埃希菌粉红色大菌落黄色痢疾志贺菌无色细小上红下黄半透明菌落伤寒沙门菌无色细小上红下黄半透明菌落黑色沉淀