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时间:2020-09-04
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1、石蜡切片实验步骤1.取材肝、肠(食道、胃、前肠、中肠、后肠)、肾、精巢、卵巢、肌肉、鳃等组织,长5mm╳5mm╳2mm。用利刀、剪剪切组织块,注意2.固定Bouin液:饱和苦味酸水溶液:甲醛(40%):冰乙酸=15:5:1=75ml饱和苦味酸水溶液+25ml甲醛+5ml冰乙酸。使用前配置。饱和苦味酸水溶液:100ml蒸馏水+1.2g苦味酸Bouin液/组织块体积比>100,须常摇动防沉底、粘壁产生固定不均匀现象;避光固定;不同的材料分瓶固定,固定瓶上贴上标签。一般组织固定12-24h。3.脱水、透明、包埋70%乙醇(1h)----70%乙醇
2、(1h)----70%乙醇(1h)----80%乙醇(30')-----90%乙醇(30')---95%乙醇(30')----100%乙醇(30')----100%乙醇+二甲苯(1:1)(30')----二甲苯(30')-----二甲苯(30')----二甲苯+石蜡(1:1)(60',60℃)----石蜡(60',60℃)----石蜡(60',60℃)----包埋4、修块用刀片修块到适当大小,上下左右边平行。5.切片6-8微米。6、粘片(40-50℃水面上,展片后捞片,或直接贴片)用蛋白甘油(新鲜蛋白25ml+甘油25ml+0.5g麝香草酚
3、或石炭酸→100ml量筒中,用力振荡使成泡沫→纱布过滤,储存于玻璃瓶中1-2月;使用原液或用蒸馏水1:1稀释后再用)粘片。7、烤片50-55℃(2h)8.染色、封片二甲苯(10-20')----100%乙醇+二甲苯(8-10')(1:1)----100%乙醇(8-10')----95%乙醇(8-10')-----90%乙醇(5-8')----80%乙醇(5-8')----70%乙醇(5-8')----60%乙醇(3-5')----50%乙醇(3-5')------40%乙醇(3-5')----水(洗净)----苏木精(5-20')-----
4、水(洗净)-------70%乙醇(5-8')----80%乙醇(5-8')----90%乙醇(5-8')----95%乙醇(5-8')-----伊红(0.2%,2-5'或25秒,10秒即可)------95%乙醇(5-8')------100%乙醇(8-10')-----100%乙醇+二甲苯(8-10')------二甲苯(8-10')----中性树(滴两滴)胶封片。
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