菌种活化保存法.doc

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1、附件:新菌株(乳酸菌)斜面培养法1.购买新菌株(安瓿瓶装冻干粉)2.菌种管开启方法一:按购买菌种上的说明进行操作即可。3.菌种管开启方法二(本次实验方法均在水平层流台进行):3.1水平层流台开启风机跟紫外灯,半个小时3.2用浸过75%酒精的脱脂棉擦净菌种管。3.3将菌种管顶端在火焰上加热,注意避免直接加热菌体或加热过度。3.4将无菌水滴至加热过的菌种管顶端,使玻璃开裂。3.5用锉刀或镊子敲下已开裂的菌种管的顶端。4.用玻璃三角瓶121.0℃灭菌约10-30ml的生理盐水20分钟5.将开封后的冻干粉倒入生理盐水中,摇匀6.用接种环

2、沾取生理盐水,转接与MRS培养基平板上,在36.5℃中恒温培养48-72小时后,得到二代菌。7.此时可以使用二代菌进行菌株扩大培养,或对其进行保存菌种。注意事项:1菌种活化前,请将冻干菌种管冷藏保存在5℃-10℃环境下。3菌种经过冷冻干燥后,生长延迟期较长,需连续两次继代培养才能正常生长。4菌种活化及使用过程应做好安全防护工作。第二代第2代)观察是否具有典型的菌落形态,然后挑取单一的纯菌落,进行革兰染色、镜检,观察其染色特征及菌体形态,并进一步做生化鉴定实验以确定菌种。第三代为工作用菌。乳酸菌菌种保存法方法一:斜面保存法(略)方

3、法二:20%甘油保存法器材:冻存盒、冻存管(2ml装)、甘油(丙三醇)、MRS肉汤培养基、1ml移液器及枪头、酒精灯、水平层流台、高压灭菌锅操作步骤:1.在水平层流台中用接种环挑取所需保存的的菌株放于灭菌过的MRS肉汤培养液,进行36.5℃恒温培养48小时2.配制40%的甘油,用移液器移取0.5ml于冻存管中,放于冻存盒3.用报纸将冻存盒包扎好,放于灭菌锅中灭菌(121.0℃、20Min)4.在水平层流台中,用移液器移取0.5ml培养后的MRS肉汤培养液加入到冻存管中,拧紧盖子,摇匀,标识。5.在冻存盒外也做好操作人,日期,所保

4、存的菌种等信息标记6.将冻存盒放于保鲜袋中,放入冰箱的冷冻室层进行保存,一般可以保存至两三年。7.若是需用,那一冻存管样进行培养即可。实验室菌种激活方法1.配制少量的液体MRS培养液(约50ml),灭菌后,冷却后,在水平层流台里,倒入一管冻存管菌种,摇匀,置于36.5℃恒温培养一到两天,然后用此培养液划平板,再从平板里挑单菌落,即可。

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