菌种甘油保存.doc

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1、菌种甘油保存1、配制30%甘油，121摄氏度高压灭菌20min，常温保存既可，一般都是现配现用2、将要保存菌种接种于LB（或带相应抗性）液体培养至对数生长期（肉眼见培养体系内浑浊即可）3、无菌条件下将菌液与30%浓度甘油1:1等体积混合于离心管中，甘油终浓度为15%4、再次使用前置冰浴融化后接种到固体培养基上即可5、一般零下20度一年左右，零下80度二年以上，时间太长就使用前活化下甘油保菌原理1、冷冻保存时菌液会被冻起来，内部产生的“冰晶”会使细胞破裂等，加入如甘油后可以防止对细胞的伤害。2、简单来说就是抗冻，原理是甘油能够提高水体的粘稠度，使其冰点

2、提高，防止细胞内部产生冰晶造成细胞的损害，一般使用甘油的终浓度在10%-20%，该范围外的浓度会对细胞产生毒性，质粒会很容易丢失3、高浓度甘油保存菌种据说会影响菌种的表达活性如果该菌只用一次怎么化都没关系的甘油浓度太高，质粒就很容易丢失