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1、382山西医科大学学报(JShanxiMedUniv)2000,31(4)文章编号:1007-6611(2000)04-0382-01菌种的甘油冷冻保存法郭淑清,田锋(山西医科大学微生物学与免疫学教研室,太原030001)摘要:以体积分数为08的甘油生理盐水为保存液,在20保存军团菌、葡萄球菌等35个菌株。观察9年,效果良好。关键词:菌种保存;甘油冷冻保存法中图分类号:Q93-336文献标识码:B菌种一词有两个不同的概念。一是细菌类微生物的分别取样培养,全部生长良好,性状与保存前一
2、致。种(species),是生物分类学名称之一。另一为我国的习惯用在基础微生物学、医学微生物学、卫生微生物学、兽医微法,指用于实验室操作的某些菌株,相当于西方实验室中的生物学、食品微生物学、工业微生物学、农业微生物学、环境stockcultures,本文菌种系后一含义。科学、分子生物学、毒理学、酶学、疫苗制备、药品生产等等领菌种是所有与微生物有关的专业教学、科研、质控、以至域,都需应用储备的标准菌株、参考菌株、特殊菌株,并常需生产的必要条件。自从上一世纪微生物学创始以来,菌种保保存新分离菌株。已报告的菌种保存方法有多种,如半固体[1][1]存便一直是一项重要的实验技术,并
3、不断得到发展。笔者近培养基普通冰箱保存法、液体石蜡保存法、脱脂牛乳低[1][2]年来试用我校谢皙子教授从美国南卡罗来纳大学医学院引温保存法、脱纤维动物血液低温保存法,虽经不同实验进的甘油冷冻菌种保存法,效果良好。报告如下。室应用,但效果均不满意。Flosdorf与Mudd创立的冷冻真1材料和方法空干燥法经历近一个世纪,技术有所改进,是迄今最佳的菌[3]11实验菌株不同种、型军团菌共23株,美国南卡罗来种保存法,但所需专用仪器一般实验室难以配备。我室历纳医学院惠赠;金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、绿脓杆菌、痢疾来沿用普通冰箱保存半固体培养物菌种。该法虽然条件要杆菌、伤寒杆菌(
4、TO、TH)、甲型副伤寒杆菌、变形杆菌、产碱求不高,然而必须每月传代一次,操作包括无菌器材准备、实杆菌、大肠杆菌、炭疽杆菌、卡他球菌共12株,均购自中国生验动物血液采集、培养基制作及分装、细菌接种及孵育、旧菌物制品药品检定所菌种中心。种管的灭菌及清洗等等,消耗大量人力物力,更严重的问题12液体培养基按不同细菌的营养要求制备。是频繁的传代接种容易导致杂菌污染及菌种变异。甘油冷13菌种保存液体积分数为08的甘油生理盐水:冻保存法则可免除上述缺点。笔者也曾试用美国疾病控制甘油(分析纯)80ml,生理盐水20ml,混匀;102.963kPa中心推荐的脱纤维血液法保
5、存军团菌菌种(该法要求保存温2(105kg/cm)蒸汽压下(温度1213)维持15~20min灭度-80,我们限于条件,改为-20),未获成功。应用本菌。文方法,则保存包括不易人工培养的军团菌在内的各类菌14菌种保存管原法用带螺盖的专用菌种保存管,因难种,均获满意结果。南卡罗来纳大学医学院原法要求菌种保于购到,改用连盖小塑料管,包装后高压蒸汽灭菌,压力及时存于-70冰箱。我室缺此设备,只能使用-20条件,菌间同上;烘干。种保存期限能否如同-70一样达10年以上,有待进一步15菌种处理及保存将欲保存的菌种接种于适宜的液体观察。培养基,按菌种生长要求,
6、在适宜的气体条件及温度下孵育参考文献:过夜或更长时间,直至生长良好。取此类培养物5份,加菌[1]蔡宏道,陈忠,孔祥云,等实用临床检验学下册(一)[M].上种保存液2份,混匀。分装于已作好标记的菌种保存管,每海:上海宏文书局,1955.1015.管约02ml,盖紧。立即放入-20冰箱。次日每种菌取一[2]蓝鸿泰细菌检验的质量控制见:刘恭植微生物学和微生管融化,接种于适宜培养基,确证生长良好且无污染,所余各物学检验[M].北京:人民卫生出版社,1988.123.[3]童善庆消毒与灭菌.见:陆德源医学微生物学第4版管即可长期保存。保存过程中切忌融化。[M].
7、北京:人民卫生出版社,1997.38.2结果和讨论作者简介:郭淑清,女,1958年11月生,大专,主管技师.实验菌种按上述方法保存后,于1年末、2年末、9年末[收稿日期:2000-01-14]
