菌种活化传代.doc

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1、菌种活化与传代一、菌种活化下列步骤请在无菌环境下操作：1、把冻干菌种管、灭菌1ml滴管、双碟、镊子、营养肉汤培养基、营养琼脂斜面数支，移入接种室或净化工作台。2、先用砂轮将冻干菌种安瓶颈部挫出刻痕,再将冻干菌种管外壁用75%乙醇擦洗消毒、稍干，用75%乙醇棉擦净，放在灭菌双碟内，待干。点燃酒精灯，将菌种管的封口一端在火焰上，烧灼红热，用灭菌滴管吸取营养肉汤培养基，滴在灼热的菌种管封口一端，使骤冷而炸裂。（有些商品化的产品打开更方便）3、取灭菌镊子，在火焰旁，将炸裂的管口打开，放入灭菌双碟内，另取1支灭菌滴管，在火焰旁吸取营养肉汤少许（无菌水也可），加至菌种管底部，将冻干菌搅动促使溶解，

2、随即吸出管内菌液，分别接种至营养琼脂斜面及普通肉汤内，并将滴管及菌种管投入消毒液内，将已接种的营养肉汤及营养琼脂斜面进行培养。(a)适用细菌用无菌吸管，吸取0.3-0.5ml指定之液体培养基或无菌水，滴入内管内，并轻微震荡（可用该吸管协助），直到均匀悬浮。(b)适用霉菌、酵母菌用无菌吸管，吸取0.3-0.5ml无菌水，滴入内管内，待干燥粉末溶解后，以无菌吸管吸取并滴入约含有5ml无菌水之试管内，轻微震荡使其均匀后，静置30至60分钟。4、某些菌种经过冷冻干燥保存后，迟滞期较长，必须等培养二倍时间后才能长出，且再经过一、二次继代培养才能正常生长。经过以上的努力后仍培养失败，才视为不能活化

3、。二、菌种传代1、培养基应新鲜制备，如斜面已无冷凝水者，不宜再使用。标签上写上菌名及接种日期。至冰箱取出的菌种斜面，应在室温放置约30分钟，待温度平衡后再移入接种室或超净工作台。2、点燃酒精灯，用左手握住菌种斜面，将管口靠进火焰旁，右手拿接种棒后端，将接种环烧红30秒，随后将全部接种棒金属部分在火焰上烧灼，往返通过3次。左手将管口在火焰上旋转烧灼，右手用无名指、小指及掌部夹住棉塞，拨开棉塞，将接种环伸人管内先在近壁的琼脂斜面上靠一下，稍冷却再移至菌苔上，刮去少量菌苔，随即取出接种棒，并将菌种管口移至火焰旁。3、堵上棉塞，左手将菌种管放下，取营养琼脂斜面1支，照上述操作打开棉塞，将接种环

4、伸入管内至琼脂斜面的低部，由底向上，将接种环轻贴斜面的表面曲折移动，使细菌划在斜面的表面上。•4、取出接种棒，在火焰旁将培养基管棉塞堵上，然后将接种过细菌的接种棒在火焰上烧灼灭菌。将已接种毕的细菌管培养22~24小时，霉菌管一般置霉菌培养箱内培养7日。取出后放人冰箱保存，一般2－3个月转种一次。附一：菌种的培养与保存1、菌种活化:用无菌水溶解冻干粉菌液（一的操作），用无菌微量吸管滴入固态指定培养基某一边缘附近，以划线法接种。2、划线法简介：（1）手持金属接种环，用酒精灯将接种环（共约5公分）烧至火红，并不断来回烧烤金属固定杆之前约10公分，等待约10秒钟，将接种环前端轻触培养基边缘凝胶

5、（无菌体部份），待接种环完全冷却后，以环沾黏菌滴，由培养基边缘向中央轻轻横划紧接的并行线，直到涵盖1/3培养基为止（I区）。（2）灼烧接种环，待数秒冷却后，旋转培养基自I区涂布的边缘再横划数条线到未接种的区域（II区）。（3）.重复2.的动作完成III区与IV区。（4）灼烧接种环，将接种环归位。附三培养温度1、大肠杆菌35~37℃培养48小时金黄色葡萄球菌30~35℃培养48小时枯草芽孢杆菌30~35℃培养48小时白色念珠菌23~28℃培养7天黑曲霉23~28℃培养7天附四：接种图片（1）金属接种环（2）平板划线法