菌种传代培养

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1、4.2菌种代号国内药品微朱物检验所用的菌种代号是CMCC(F)或CMCC(B),CMCC・■屮国医学菌种保藏中心，、，B——代表细菌，F—代表真菌。金黄色葡萄球菌CMCC(B)26003人肠杆菌CMCC(B)44102枯草芽抱杆菌CMCC(B)63501口色念珠菌CMCC(F)98001黑

2、11

3、耀CMCC(F)980034.3传代和接种431菌种冻干粉复苏4.3.L1把冻干菌种管、灭菌lml滴管、双碟、锻了、营养肉汤培养基、营养琼脂斜血•数支,移入接种室或净化台。4.3.1.2先用砂轮将冻干菌种安甑瓶颈部挫出挫痕，再将

4、冻干菌种管外壁用75%酒精擦洗消毒，稍干，用75%乙醇棉擦净，放在灭菌双碟内，待干。点燃酒精灯，将菌种管的封口一端在火焰上烧灼红热，用灭菌滴管吸取营养肉汤培养基，滴在灼热的菌种管封」一端，是骤冷而炸裂。431.3取灭菌锻了，在火焰旁，将炸裂的管口打开，放入灭菌双碟内，领取一只灭菌滴管,在火焰旁吸取营养肉汤少许，加至菌种管底部，将冻干菌搅动促使溶解，随即吸出管内菌液，分别接种至营养琼脂斜面及普通肉汤内，并将滴管及菌种管投入消毒液内，将己接种的营养肉汤及营养琼脂斜而进行培养。4.3.2菌种斜面传代操作4.3.2.1培养基应新

5、鲜制备，如斜面已无冷凝水者，不宜再使用。标签上注明菌种名及菌种编号。至冰箱取出的菌种斜而，应在室温放置约3()分钟，待温度平衡后再移入接种室或超净工作台。4.322点燃酒精灯，川左手握住菌种斜面，将管口靠近火焰旁，右手拿接种棒后端，将接种环烧红3()秒，随示将全部接种棒金属部分在火焰上烧灼，往返通过3次。左手将管口在火焰上旋转烧灼，右手无幺指，小指及掌部夹住棉塞，拨开棉塞，将接种环深入管内先在近壁的琼脂斜面上靠一下，稍冷却再移至菌苔上，刮去少量菌苔，随即取出接种坏，并将菌种管口移至火焰旁.4.323堵上棉塞，左手将菌种管

6、放下，取营养琼脂斜面一支，照上述操作打开棉塞，将接种坏深入管内至琼脂斜面的底部，由底向上，将接种坏轻贴斜而的表而曲折移动，使细菌划在斜面的表面上。4.3.2.4取出接种棒，在火焰旁将培养基管棉塞堵上，然后将接种过细菌的接种棒在火焰上烧灼灭菌。4.4菌种的培养与保存4.4.1人肠杆菌35-37摄氏度培养48小时金黄色葡萄球菌30-35摄氏度培养48小时枯草芽他杆菌3()・35摄氏度培养48小时白色念珠菌23・28摄氏度培养7天黑曲23-28摄氏度培养7天4.4.2将培养物管口培养箱取出后放入冰箱(2&摄氏度)保存，一般2个

7、月转种一次。4.5菌悬液的制备451取上述培养好的菌种斜而移入接种室或净化丄作台，放置室温后，用接种环取菌苔少许接种至营养肉汤屮(l()ml/支，已灭菌)，将已接种毕的细菌管置35・37摄氏度培养1*24小时，取出备用。一般于冰箱中保存可用两周。4.5.2取上述培养好的营养肉汤菌悬液(浓菌液)1ml,加到9ml0.9%无菌氯化钠溶液混匀，为10・1,再取另一只刻度吸管吸取10-1菌液lml加到9ml().9%无菌氯化钠溶液中混匀,为10-2......以此类推，稀释至含活菌数在50・100个。用平板计数。4.5.3此稀释

8、菌液用于试验后加阳性对照，可在一周内使用。4.7记录4.7」传代和接种使用后，应做好《菌种传代接种记录》。4.7.2菌悬液制备后，应做好《菌液制备使用记录》。依据：屮国药典2010年版二部及菌种使用说明书1.标准菌的来源标准菌株由屮国药品生物制品检定所医学菌种保藏中心(ChinaMedicalculturecollection,CMCC)提供的冷冻干燥菌种(0代)或由上级药检部门己接种好的菌种斜面(3代)。黑Illi霉的0代菌种为保存于含15%甘汕的0.9%无菌氯化钠溶液中的沦子悬液冷存管。中国药品生物制品检定所医学微生

9、物菌种保藏管理中心提供的冷冻干燥菌种的标签CMCC(B)代表细菌(bacteria),CMCC(F)代表真菌(fungi)每种菌具有固定的代号。2.标准菌的验收从菌种保藏中心购买的原始菌种管是玻璃安瓶装的冻干菌，接收同时应检查是否有随菌种附有的相关资料。接收菌种时应检查安瓶的数量和名称，和每一支安瓶的完整性。在相应的菌种接收记录上记上所有的关于菌种的信息，如名称、数呆和接收日期等。在菌种安瓶及菌种管上粘贴标签，内容包括：菌种名称、菌种代号、代次、接收FI期、接收人、贮存条件、有效期至。新购入的()代原始菌种储存于一2()

10、°C,有效期为三年。从上级药检部门购买的已接种好的菌种斜面(3代)应检查菌种管是否完好。储存于2〜8°C,冇效期为3个刀。3.标准菌的复苏、复壮及标准储备菌株的制备3.1物品及试剂:接种针、酒精灯、移液管、75%酒精及75%酒精棉球3.2培养基改良马丁琼脂培养基:用于黑曲霉复苏、复壮•液体硫乙醇酸盐培养基:用于牛也梭