来航鸡FOXL2蛋白单克隆抗体的制备.pdf

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1、-750·中国免疫学杂志2013年第29卷doi：10．3969／j．issn．1000~84X．2013．07．019来航鸡FOXL2蛋白单克隆抗体的制备鲁毅徐萍①②李任峰李超英③李学斌王三虎陈明艳刘卫邓佳霖②(河南科技学院动物科学院，新乡453003)中国图书分类号Q38$831文献标识码A文章编号1000-484X(2013)07．0750-05[摘要]目的：制备来航鸡FOXL2蛋白的单克隆抗体。方法：利用生物信息学的方法分别预测来航鸡FOXL2蛋白最有可能的线性表位，并人工合成多肽，高效液相色谱分析其纯度，与KLH偶联后免疫小鼠制备其单克隆抗体

2、，用间接ELISA方法和免疫印迹进行筛选，然后对筛选出来的细胞株进行一般性质测定、亲和常数测定、Ic测定。结果：合成多肽纯度>95％，细胞融合后，其平均融合率为75％，并用间接ELISA方法和Westernblot筛选出1条可与FOXL2蛋白发生明显反应的细胞株c2；经测定，c2细胞株上清效价为1／128，腹水效价为1／256，其亚型属于IgGl，杂交瘤细胞染色体为102条，腹水单抗的蛋白含量为1．576g／L，其亲和常数为2．12×10L／mol，IC值为0．08247L。结论：成功制备了FOXL2蛋白单克隆抗体，为下一步深入研究FOXL2蛋白奠定基

3、础。[关键词]来航鸡；FOXL2；单克隆抗体；表位PreparationofamonoclonalantibodyspecifictoFOXL2proteinofLeghornchickenLUYi，XU，LIRen—，LIChao—Ying，LIXue—Bin，WANGSan—Hu，CHENMing—Yah，LIUWei，DENGJia—Lin．SchoolofAnimalScience，HenanInstituteofScienceandTechnology，Xinxiang453003，China[Abstract]Objective：Topre

4、paremonoclonalantibodyofLeghornchickenFOXL2protein．Methods：First，bioinformaticsmethodswereusedtopredictitsmostpossibleepitopes，thenpolypeptidesweresynthesised，puritywereanalysisedbyliquidchroma—tography，coupledwithKLH．Later，themicewereimmunizedbythepolypeptideswhichcoupledwithKL

5、H．AfterfusedbetweenthespleniccellofimmunizedmiceandNSOmyelomacell，theindirectELISAandWesternblotwereusedtodetectwhetherthehybridomacellcansecreteantibodyagainstpolypeptideandFOXL2protein．Last，thegeneralnature，bindingcurveandIC50ofmonoclonalanti—bodyweremeasured．Results：Itwasfoun

6、dthatthepurityofartificialpolypeptideswereall>95％．Aftercellfusion，itsfusionratewas75％，andonecelllineswerescreenedbyindirectELISAandWestenblot；celllinesupernatanttiterwas1／128，theascitestiterwas1／256，IgG1type，had102cellchromosome，asciticfluidproteincontent1．576g／L；itsaffinitycons

7、tantwas2．12×10L／mol，IC50valuewas0．08247L．Conclusion：WesuccessfullypreparedtheFOXL2proteinmonoclonalantibody，thisworkshouldhelpedforadeepresearchtoFOXL2．[Keywords]Leghornchicken；FOXL2；Monoclonalantibody；EpitopeFOXL2基因(wingedhelix／forkheadtranscription发挥着重要作用]2002年，Fuhrer等l8科学家fac

8、torgene2，FOXL2)属Fox超家族成员。据研究，发现FOXL2不仅在抗击卵泡凋亡、维