大杯蕈子实体多糖提取优化及抗氧化活性分析-论文.pdf

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1、第36卷第3期泰山学院学报Vo1．36N0．32014年5月JOURNALOFTAISHANUNIVERSITYMay．2014大杯蕈子实体多糖提取优化及抗氧化活性分析张晨，赵法茂2，胡春龙，刘正帅，刘贵芬2，贾晓(1．山东农业大学作物生物学国家重点实验室，山东泰安271000；2．泰山学院生物与酿酒工程学院，山东泰安271021)【摘要]探析大杯蕈子实体多糖的适宜提取条件，明确其抗氧化活性．以大杯蕈子实体为材料，利用Hackeu—Burman(PB)实验和响应面分析法(RSM)优化子实体多糖(FPS)的分离提取条件；以总还原力、羟基自由基、超氧阴离子自由基和二苯代苦味肼(DPP

2、H)自由基为指标，测定FPS抗氧化活性．结果表明，FiX3最佳提取条件是乙醇倍数3．55，醇沉时间28．77h，提取次数2．57次，FPS理论得率是2．549％．为操作方便，调整为乙醇倍数3．6，醇沉时间29h，提取次数3．00，在此条件下，多糖的理论得率是2．329％，实际得率为2．015％．当FPS浓度为5000trg／mL时，大杯蕈子实体多糖的总还原力为0．629，对于羟基自由基、超氧阴离子自由基、DPPH的清除率分剐为27．19％、60．101％和69．7％．随着FPS浓度的增加，其还原力逐渐增强，对羟基自由基、超氧阴离子自由基和DPPH的清除率也逐渐增大，证明大杯蕈子实

3、体多糖具有潜在的抗氧化活性．[关键词]大杯草；子实体多糖；提取优化；体外抗氧化活性[中图分类号】Q939．5[文献标识码】A[文章编号】1672-2590(2014)03-0037一lO大杯蕈(Clitocybemaxima)在真菌分类学上，属担子菌纲(Basidiomycetes)、口蘑科(Tricholomatace—ae)．大杯蕈营养丰富，蛋白质含量丰富，必需氨基酸的数量及组成比一般食用菌更接近模式蛋白．另还含有多种人体必需的矿物元素，如锌、钼、钴等微量元素．经全国各地引种栽培，大杯蕈已实现规模化生产，市场前景广阔．近几年来，食用菌多糖在人体医疗保健中的作用13益引起人们的

4、关注．食药用多糖的组成和结构主要有以下几种类型：(1)葡聚糖，是食用菌多糖中的主要构成部分，其主链是由13—1，3糖苷键连接，支链由B一1，6糖苷键连接，如香菇多糖；(2)甘露聚糖，其主链是由—l，4糖苷键连接，如灵芝多糖；(3)杂多糖；(4)糖蛋白和多糖肽等¨．食用菌多糖是能够控制细胞分裂分化，调节细胞生长衰老的一类活性多糖，主要由几丁质和B一(1，3)一D一葡聚糖构成，它主要是从担子菌与子囊菌子实体、菌丝体和发酵液中分离出的具有生物活性的天然高分子多聚物．药理实验表明，食用菌多糖具有调节人体机能、提高免疫力、增强骨髓造血功能及抗辐射、抗癌、抗病毒、抗肿瘤、延缓衰老、降血脂、促

5、进儿童生长发育等生理功能；还可通过非特异性途径，提高机体对抗原或微生物病原体的特异性反应j，因而被称为“生物应答调节剂”．目前国内外对大杯蕈研究主要集中在探讨其生物学特性、化学组成成分、营养价值及高产栽培技术等，但对其含有的生物活性成分尤其是多糖的研究比较缺乏-6J．本实验拟利用Plackett—Burton实验(PB实验)和响应面分析法(Responsesurfacemethodology，RSM)优化大杯蕈子实件多糖(Frutingbodypolysaccharide，FPS)的分离提取条件，并对其体外抗氧化活性作初步分析，旨在为大杯蕈子实体多糖提取工艺的优化及构效关系的深人

6、研究提供理论基础．[收稿日期]2014一o4-03[基金项目]山东省自然科学基金项目(ZR2010CM034)；2013年全国大学生创新创业训练计划项目[作者简介]张晨(1991一)，女，山东泰安人，山东农业大学作物生物学国家重点实验室硕士研究生．38泰山学院学报第36卷1材料和方法1．1实验材料大杯蕈(Clitocybemaxima)子实体，由山东农业大学微生物实验室提供．1．2实验方法1．2．1大杯蕈子实体多糖PB实验(1)大杯蕈子实体多糖的提取大杯蕈烘干后于粉碎机中粉碎成粉末，一4~C冰箱保存备用．使用DX8Trial软件绘制大杯蕈子实体多糖PB实验表格(表1)，采用9因素

7、3水平的方案，各因素对应项目如表1．分别称取0．5g大杯蕈子实体粉末放入编号为1—17的离心管中．按照表1所示实验项目进行实验，得到17组大杯蕈多糖提取物．向l7只离心管中加入20rnl水，70~C左右水浴，直至溶解．3600×g离心15min．取lml上清液置于试管中，稀释lO倍，分别取1ml稀释液设置三组平行试验．分别向每支平行试管中加人1ml去离子水，1ml新配苯酚溶液，5ml浓硫酸．反应20min，于490nm下测定OD值．表1大杯蕈子实体多糖的PB试验因素水平及编码(2