实验报告-微生物.doc

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1、实验报告王唯一精94同组人：刘昕汪梦婕I环境中微生物的监测和分离纯化一、实验目的1.学习并掌握无菌操作技术原理和方法2.学习用稀释涂布法分离微生物3.认识微生物存在的普遍性，体会无菌操作的原理二、实验原理为微生物提供适宜培养它的营养、酸碱度、温度和氧等条件，使其正常生长。三、实验材料与试剂1、土样10g，无菌生理盐水2、取液器（1000微升1支），培养箱，培养皿，无菌有帽试管，三角瓶，无菌涂棒，接种环，1000微升无菌吸头若干，记号笔，酒精灯，火柴，试管架四、实验步骤（一）培养基的制备按以下步骤制备牛肉膏蛋白胨平板培养基，每组18—20个平板成分：牛肉膏1

2、.5g，蛋白胨3g,氯化钠1.5g,自来水300ml制法：1.于500ml三角瓶内加入以上成分，混合溶解。2.调pH至7.4~7.63.加入5—6g琼脂4.0.1Mpa灭菌20分钟，冷却到60度左右，采用叠皿法把培养基倒入灭好菌的90mm培养皿中，制作无菌平板，凝固后倒置待用。（二）周围环境中微生物的检测在牛肉膏蛋白胨培养及平板上做如下实验：1.取一个培养皿，分区，做好标记，分别于培养基不同区内接种实验手套、书、餐卡、手表上的细菌（进行涂抹）2.取一个培养基，分区，分别用未细的手指、自来水洗过的手指、洗手液洗过的手指、肥皂洗过的手指涂抹培养基将以上培养基用

3、报纸包好倒置于37度培养箱里培养24小时观察结果（三）从土壤中分离微生物1.采土样选择较肥沃的土壤，铲去表层土，挖5—20cm深的土壤数十克，装入已灭菌的牛皮纸袋，封好袋口，做好编号记录，带回实验室共分离用。2.制备土壤稀释液称取土样1g，放入盛99ml无菌水并带有玻璃珠的三角瓶中，置摇床震荡5分钟使土壤均匀分散成为土壤悬液。用1ml的无菌吸头从中吸取1ml土壤悬液，注入盛有99ml无菌水并带有玻璃珠的三角瓶中，吹吸三次，震荡均匀，制成稀释度为10-4的土壤溶液。逐次取1ml土壤溶液分装到灭菌后的Eppendorf管中，发给每个小组备用。3.涂布用一只新的

4、无菌吸头，由稀释好的土壤稀释液中吸取100微升，较均匀地放入已写好稀释度的牛肉蛋白胨培养基平板上，用无菌玻璃涂棒涂布均匀，一定要多涂几遍，从概率角度来说，涂布时间越长越好（1~2分钟），使细菌均匀分布，此步是实验成功的关键。2.培养将牛肉蛋白胨培养基平板倒置于37度温箱中培养24小时，统计所长出的菌落数。3.菌落计数培养24小时后，取出培养平板，算出同一小组几个平板上的菌落的平均数，换算出土样中的菌数。土壤中的细菌含量（个/g土壤）=菌落平均数*10*稀释倍数有较大片菌苔生长时，弃用，以无大片菌苔生长的培养皿计数；若成片菌苔大小不到培养皿的一半，其余一半分

5、布均匀，将此一半计数*2五、实验结果（试验品/菌落数）1.手套27书4餐卡3手表222.未洗的手指34自来水洗过的手指33洗手液洗过的手指1肥皂洗过的手指10243.土壤30，18，12（*10*稀释倍数=细菌含量）（三个样本）六、实验讨论1.无菌操作要在酒精灯旁进行，同时不能离火焰太近；培养皿的盖要开小一点，以免空气中杂菌混入；操作要迅速。2.日常生活中吃剩的食物要尽量密封保存，如加保鲜膜，饭前要洗手3.在锅中盖着锅盖可以避免空气中杂菌的进入，且锅内环境不适宜细菌生长，因此不易坏，而在碗中食物没有与空气隔绝，且开放的环境与室温适宜细菌生长，因此易变质。4

6、.由于未洗的手与用自来水洗过的手上菌落数基本相当，且都远远小于用肥皂洗过的手上的菌落数，因此反复洗手对灭菌并无作用。对于实验结果：手指的检测结果数据相差较大，可能由于涂抹时用力不同导致接触面积不同从而使菌落数不同，今后实验时要注意尽量注意控制变量，在其他条件相同的情况下比较结果才更可靠。II固定化酵母细胞发酵啤酒实验与酸奶制作一、实验目的1.了解固定化细胞技术的方法和意义2.了解酵母发酵产生啤酒的过程3.学习酸奶制作方法4.了解纯种发酵和传统发酵在无菌操作方面的差别一、实验原理1.固定化技术固定化技术就是将生物酶或细胞固定在一定的基质上。由于在制定固定化细

7、胞时，细胞和载体不起任何反应，细胞处于最佳生理状态；同时固定化细胞有载体作为屏障，可避免外界不利因素的影响，因此能迅速增值；增殖酵母凝集在凝胶表面形成浓厚的菌体层，因此酵母能迅速与基质接触，从而缩短周期，提高啤酒产量。2.啤酒生产的过程麦芽制造麦芽汁的制造发酵过滤灭菌3．常见的乳酸产品凝固型酸奶搅拌型酸奶酸性乳饮料酸奶功效：利于人体消化吸收，促进胃肠蠕动，乳酸机酸奶中的其他有机酸还能有效的改善肠道菌群，抑制病原菌繁殖；降血压、降胆固醇、增强心脏功能；预防老年性骨质疏松和乳腺炎，阻碍铅吸收，减轻化疗副作用，提高人体的免疫功能；护肤，护发。二、实验材料与试剂1

8、.无菌滴管、无菌封口膜封好的100ml三角瓶2.发酵培养基：100