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1、广州大学综合设计性实验报告课程：微生物实验实验课题：土壤中产淀粉酶芽孢杆菌的筛选及淀粉酶活力的测定学院：生命科学学院姓名：徐嘉宽学号：1414300030班级：生技142小组成员：一实验摘要本次实验通过采用5点采样方法在校园中采取2处土壤样品，运用梯度稀释的方法分离培养出不同生长形态的细菌，镜检后挑选几个菌落进行纯培养，用淀粉培养基鉴定其是否产淀粉酶，通过单染色、芽孢染色、革兰氏染色确定菌株的形态及革兰氏阴阳性，再通过各种生化试验鉴定菌株的特性，确定了我们所分离的2株菌株其中一株为蜡状芽孢杆菌。一实验目的1.掌握从土
2、壤等复杂的微生物环境中分离纯化技术2.掌握培养基的配置方法及常用的微生物培养方法3.掌握常用的微生物形态学鉴定方法、生理生化鉴定方法4.了解微生物的16SrRNA序列鉴定方法、免疫学鉴定方法5.掌握淀粉酶活力测定的原理及方法6.掌握菌种保藏技术7.培养数据统计、分析能力8.培养团队协作精神，增强沟通合作能力9.与其他小组交流合作、数据共享，进行更深入的探讨10.学会查找、收集、整理资料二实验原理芽孢杆菌(BaciUus)是一类好氧或兼性厌氧、产生抗逆性内生孢子的杆状细菌。这类细菌多数为腐生菌,主要分布于土壤、植物体表
3、面及水体中,由于它们能够产生对热、紫外线、电磁辖射和某些化学药品有很强抗性的芽孢,因此能忍受多种不良环境。土壤中蕴含着丰富的微生物资源,芽孢杆菌是其中具有重要应用价值的微生物类群。有些菌种可以分泌多种酶,可应用于工业生产;有些菌种能产生对昆虫毒性较强的蛋白,可生产微生物农药;有些菌种可作为多种分泌蛋白基因表达受体,在基因工程领域中有较高的应用价值。 土壤具有微生物进行生长繁殖和生命活动中所需的各种条件，是微生物生活最适宜的环境。其中的微生物的数量因土壤类型、季节、土层深度与层次等不同而异。一般地说，在土壤表面，由于日
4、光照射及干燥等因素的影响，微生物不易生存，离地表10 cm～30 cm的土层中菌数最多，随土层加深，菌的数量减少。淀粉酶是水解淀粉和糖原酶类的总称,是用于酿酒、食品、医药、纺织、饲料等具有商业价值的重要酶类。广州大学城四面环江，地处南亚热带,其气候属南亚热带典型的季风海洋气候。芽孢杆菌资源非常丰富。本方案在广州大学城预定区域釆集土壤样品,采用纯培养的方法,分离获得芽孢杆菌。对菌株进行形态学观察及生理生化分析,以挑选出可产淀粉酶的菌株。一实验材料1.试剂与配方试剂：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、马铃薯、葡萄糖；可溶性淀
5、粉、K2HPO4、KNO3、MgSO4•7H2O、FeSO4•7H2O、95%乙醇、0.5%番红色液、蒸馏水等工具:取样：铁锹、尺子、塑料袋等培养：接种环（针）、培养皿、试管、试管架、锥形瓶、塞子、标签纸、打火机、酒精灯、报纸、橡皮筋、无菌棉签、载玻片、香柏油、二甲苯、擦镜纸、精密pH试纸、吸水纸、培养基平板，无菌水，试管架，酒精灯，酒精瓶，记号笔，废物缸，牙签等；其他工具：无菌操作台、恒温振荡培养箱、恒温培养箱配方：1)牛肉膏蛋白胨培养基：营养琼脂3.3%、蒸馏水100mL、pH7.2-7.4。2)营养肉汤:牛肉膏
6、0.3%、蛋白胨1.0%、NaCl0.5%、蒸馏水100ml、pH（5.7、7.2→对照）。3)半固体培养基(运动性试验）:琼脂0.5%、牛肉膏0.3%、蛋白胨1.0%、NaCl0.5%、蒸馏水100ml、pH7.2-7.4。4)酪素水解培养基（酪素水解试验):取5g脱脂奶粉与一号三角瓶中，加入50ml蒸馏水，110℃灭菌。另称1.5g琼脂置于含50mL蒸馏水的二号三角瓶中,120℃灭菌,待冷至45-50°C时,将两液混匀倒成平板,即为牛奶平板。将平板倒置过夜,使表面水分干燥。5)淀粉水解培养基:营养琼脂3.3%、可
7、溶性淀粉2%、蒸馏水100ml、PH7.2-7.46)卵黄反应培养基：无菌条件下去卵黄加等量的生理盐水，摇匀后，取5ml加入到融化的约50-55℃的100ml的营养琼脂中（内含1g葡萄糖)，混匀后倒入培养皿内。制成的卵黄平板过夜后即可使用。7)硝酸盐还原实验培养基:胰蛋白胨1.0%,酵母浸粉0.5%,NaCl1.0%,KN030.1%,蒸馏水1OOmL,调节pH7.0。8)发酵培养基:玉米粉2%、黄豆饼粉1.5%、CaCl20.02%、MgSO40.02%、NaCl0.25%、K2HPO40.2%、柠檬酸钠0.2%、
8、硫酸氨0.075%(溶解后加)、Na2HPO40.2%,pH值7.0。9)明胶培养基：NaCl0.5%、蛋白胨1.0%、牛肉膏0.3%、明胶12%、蒸馏100mL，调pH7.2-7.4。1)西蒙斯氏柠檬酸钠盐培养液：柠檬酸钠0.2%、NaCl0.5%、MgSO40.02%、磷酸二氢钾0.1%、磷酸氢氨0.1%、溴麝香草酚蓝水溶液1ml、琼脂2%
