微生物土壤分离实验报告 山东大学.doc

《微生物土壤分离实验报告 山东大学.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、微生物实验报告----微生物土壤分离姓名：学号：班级：生科二班组别：四组同组者：时间：2012年12月山东大学实验报告2012年12月姓名系年级2011级生科2班组别四同组者科目微生物学实验题目微生物的土壤分离一、【实验题目】微生物的土壤分离二、【实验目的】1.从各地区的土样中筛选含果胶酶的菌株和产几丁质酶的菌株。2.熟悉菌株筛选的具体操作流程。3.根据菌落形态，染色结果，运动性等来鉴定未知细菌；小室培养法观察未定未知真菌。4.掌握菌株筛选、分离纯化、鉴定等具体操作流程。5．复习本学期所学的微生物实验的相关的操作步骤，并进一步强化无菌操作的概念。三、

2、【实验试剂与器材】1.土样：7号土样2.菌种：革兰氏染色：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌3.试剂及培养基培养基：几丁质酶筛选培养基；液体PDA培养基；固体PDA斜面培养基；几丁质酶发酵培养基；果胶酶筛选培养基；果胶酶液体种子培养基、发酵产酶培养基；固体斜面培养基、半固体牛肉膏蛋白胨培养基、淀粉培养基、葡萄糖发酵培养基、乳糖发酵培养基、吲哚培养基、甲基红培养基试剂：草酸铵结晶紫染液、番红复染液等各种染料以及卢戈氏碘液、95%乙醇5%孔雀绿水溶液、氯化钠、刚果红、吲哚试剂、甲基红试剂、蒸馏水4.仪器显微镜、锥形瓶、培养皿、试管、试管架、移液管、移液枪、烧杯、玻

3、璃棒、载玻片、盖玻片、刮刀、U型管、德汉氏小管、酒精灯、漏斗、接种环、滤纸、棉塞、牛皮纸、无菌操作台、灭菌锅、纱布、双层瓶等四、【实验原理】1．微生物的分离和纯化在土壤、水、空气或人及动、植物体中，不同种类的微生物绝大多数都是混杂生活在一起，当我们希望获得某一种微生物时，就必须从混杂的微生物类群中分离它，以得到只含有这一种微生物的纯培养，这种获得纯培养的方法称为微生物的分离与纯化。为了获得某种微生物的纯培养，一般是根据该微生物对营养、酸碱度、氧等条件要求不同，而供给它适宜的培养条件，或加入某种抑制剂造成只利于此菌生长，而抑制其他菌生长的环境，从而淘汰

4、其他一些不需要的微生物，再用稀释涂布平板法或稀释混合平板法或平板划线分离法等分离、纯化该微生物，直至得到纯菌株。土壤是微生物生活的大本营，在这里生活的微生物无论是数量和种类都是极其多样的，因此，土壤是我们开发利用微生物资源的重要基地，可以从其中分离、纯化到许多有用的菌株2．与果胶酶有关的（1）果胶：果胶是一组聚半乳糖醛酸，在适宜条件下其溶液能形成胶和部分发生甲氧基化（甲酯化，也就是形成甲醇酯），其主要成分是部分甲酯化的a(l,4)一D一聚半乳糖醛酸，残留的羧基单元以游离酸的形式存在或形成铵、钾钠和钙等盐。（2）果胶酶：是分解果胶的一个多酶复合物，通常

5、包括原果胶酶、果胶甲酯水解酶、果胶酸酶。通过它们的联合作用使果胶质得以完全分解。天然的果胶质在原果胶酶作用下，转化成水可溶性的果胶；果胶被果胶甲酯水解酶催化去掉甲酯基团，生成果胶酸；果胶酸经果胶酸水解酶类和果胶酸裂合酶类降解生成半乳糖醛酸。（3）产生果胶酶的微生物：细菌、放线菌、酵母和霉菌等。3．DNS法测果胶酶的酶活的原理根据果胶酶水解果胶生成半乳糖醛酸，而半乳糖醛酸是一种还原糖，与3，5-二硝基水杨酸共热后被还原成棕红色的氨基化合物，在一定的范围内，还原糖的量和反应液的颜色呈比例关系，可利用比色法在540nm进行测定。4．产果胶酶菌株的筛选原理（

6、1）菌种的筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛，挑选具有某种能力的有用菌种，根据不同的筛选目的，采用不同的筛选模型。（2）配制以果胶为唯一碳源的筛选培养基，在该培养基上，只有能分解利用果胶的菌株才能够生长，依此来从土壤中筛选出能够产果胶酶的菌株。刚果红（CongoRed,简称CR）是一种染料，它可与果胶形成红色复合物，但并不和果胶水解后的产物发生这种显色反应，在含有果胶的培养基中加入刚果红时，刚果红能与培养基中的果胶形成红色复合物。当果胶被果胶分解菌分泌的果胶酶分解后，刚果红-果胶的复合物就将无法形成，从而在培养基中形成以果胶分解菌为中心的透明圈，这样我

7、们就可以通过是否产生透明圈来筛选果胶分解菌。5.与几丁质酶有关的（1）几丁质：几丁质是由N一乙酰．D．氨基葡萄糖以β-1，4糖苷键连接而成的高分子聚合物,能产生几丁质酶的生物很多，包括植物，动物和微生物。虽然几丁质酶产生生物很多，但在筛选几丁质酶时往往集中于微生物上．（2）几丁质酶：关于几丁质酶这一概念目前用得比较混乱，广义的几丁质酶是指所有与几丁质降解有关的酶，还包括脱乙酰酶，壳聚糖酶，几丁寡糖酶，几丁二糖酶等，狭义的几丁质酶是指催化水解至少含有一个N．乙酰葡萄糖胺基团糖苷键的酶，包括几丁内切酶和几丁外切酶。（3）传统的筛选方法主要有两种，一是在胶

8、体几丁质琼脂培养基上看透明圈的大小及清晰程度；二是水解几丁质荧光类似物的方法．这两种方法的优点是快速直观，缺