微生物综合实验报告

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1、vuiniSTK9>1n-■I»cRns!»!»班跸!9!姓名：杨延景班级：食品1101学号：2011040632指导老师：郭永黄河水利职业技术学院目录食品中菌落总数的测定（一）前言3（二）实验目的.3（三）实验原理.3（四）实验器材3（五）实验步骤4（六）实验结果以及分析7（七）国标中微生物菌落总数标注7大肠菌群的测定……99……91015（八）实验目的（九）实验原理（十）实验器材（十一）实验步骤（十二）实验结果以及分析（一）项目三实验器材…•（二）实验步骤…•（三）实验结果…•革兰氏染色1818实验感想食品中菌落总数的测定前言随着生活人们生活水平的提高，和社会的发展与进步食

2、品安全问题越来越受到人们的关注，然而食品方面的问题这几年也越来越突出，食品安全问题屡见不鲜。由前几年的“苏丹红红心鸭蛋”再到这几年的“三聚铽胺奶粉事件”和“瘦肉精事件”还有“地沟油”等等一系列的事件都不得不让人们对食品安全问题高度关注。然而食品中微生物的菌落总数是用来判定食品被细菌污染的程度即清洁状态及其安全质量，它反映食品在生产过程屮是否符合国家食品安全标准要求，以便对被检样品做出适当的食品安全评价。然而微生物的检测主要依靠菌落总数（colonycount）的测定，菌落总数的测定是指盘品检样经过处理，在一定的条件下（样品处理、培养基成分、培养温度和时间、pH、需氧条件）培养后

3、，所得到的每单位食品（lg、lmL或lcm2）中所含细菌菌落的总数。所以说通过这些实验让我们更好的掌握菌落总数的测定一方面要求和配置；.掌握我国食品安全标准屮微生物检验指标及意义；.掌握常见各类食品微生物检验采样方法；.掌握食品微生物检验各项指标检验方法和技能；在我们以后的日常工作和学习中更好的为人们服务。实训一食品中菌落总数的测定一、实验目的1.学习并掌握GB4789.2-2010食品屮菌落总数的原理和基本方法，以判别食品的质量；2.体会盘菌落总数检验的目的和意义。二、实验说明菌落总数是指食品检样经过处理，在一定条件下培养后，所得lg或ImL检样中所含细菌菌落总数。菌落总数主

4、要作为判别食品被污染程度的标志，也可以应用这一方法观察细菌在食品屮繁殖的动态，以便对被检样品进行食品安全与质量评价吋提供依据。三、实验器材1.培养基：平板计数琼脂培养基，磷酸盐缓冲液，无菌生理盐水。2.仪器用具：恒温培养箱（36"C）、恒温水浴锅、酒精灯、试管架、无菌培养皿、无菌移液管（10mL和ImL）、无菌不锈钢勺、酒精灯。四、操作步骤图9-1食品中菌落总数的测定1.取样、稀释（1）以无菌操作，取检样25g（或25niL）剪碎放于含有225mL灭菌生理盐水或磷酸盐缓冲液的灭菌玻璃瓶内（瓶A预置适量的玻璃珠）或灭菌乳钵经充分振摇或研磨制成1:10的均匀稀释液。固体检样在加入稀

5、释液后，最好置火菌均质器中以8000〜10000r/min的速度处理lmin,制成1:10的均匀稀释液。(2)用ImL灭菌吸管吸取1:10稀释液ImL,沿管壁徐徐注入含有9mL灭菌生理盐水或磷酸盐缓冲液的试管内，振摇试管混合均匀，制成1:100的稀释液。(2)另取ImL灭菌吸管，按上项操作顺序，制10倍递增稀释液，如此再递增稀释一次。(3)根据对样品污染情况的估计选择2〜3个适宜稀释度，分别在制作10倍递增稀释的同时，以吸取该稀释度的吸管移取ImL稀释液于灭菌平皿屮，每个稀释度做两个平皿。冋吋，分别吸取lniL空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。(4)及时将15〜20mL冷

6、却至46°C的平板计数琼脂培养基(可放置于46±1°C恒温水浴箱中保温)倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。1.培养(1)待琼脂凝固后，翻转平板，置36土1°C温箱内培养48±2h,水产品30±1°C培养72±3h。(2)如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表而覆盖一薄层琼脂培养基(约4mL),凝固后翻转平板，按上述条件进行培养。2.菌落计数可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成革位(colony-formingunits,cfu)表示。1.菌落计数(1)选取菌落数在30〜300cfu之间、无蔓延

7、菌落生长的平板计数菌落总数。低于30cfii的平板记录具体菌落数，大于300cfti的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。(2)其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半屮菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2,代表一个平板菌落数。(3)当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数。1.菌落总数的计算方法（1）若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范