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1、·434·中国免疫学杂志2002年第18卷血清HBV标志物阴性肝炎肝组织中HBVDNA表达的研究①①周小平 陈 勇 李爱月 周永兴 李向霞 (解放军第一医院传染科,兰州730030) 中国图书分类号 R51216 文献标识码 A 文章编号 10002484X(2002)0620434202摘 要 目的:研究HBVDNA在血清HBV标志阴性肝炎肝组织中的表达。方法:对45例HBV血清标志阴性肝炎患者,进行肝组织HBVDNA的原位杂交检测。结果:原位杂交表明,HBVDNA阳性7例(阳性率15156%),阳性信号主要存在于肝细胞的胞核中,少数位于胞浆内;结论
2、:血清HBV标志阴性肝炎肝组织中可检出HBVDNA,有利于提高对HBV感染的诊断。关键词 乙型肝炎病毒 HBV标志 原位杂交ExpressionofHBVDNAinlivertissuesofpatientswithHBVserummarkernega2tivehepatitisZHOUXiao2Ping,CHENYong,LIAi2Yueetal.DepartmentofLemology,theFirstHospitalofPLA,Lanzhou730030.①DepartmentofInfectiousDisease,TangduHospital,the
3、FourthMilitaryMedicalUniversity,Xi’an710038AbstractObjective:TostudytheexpressionofhepatitisBvirus(HBV)DNAinthelivertissuesofpatientswithHBVserummarker2negativehepatitis.Methods:TheexpressionofHBVDNAinthelivertissuesweredetectedbyinsituhybridizationin45HBVmarker2negativehepatitispa
4、tients.Results:ItwasshowedthatHBVDNAin7caseswaspostive,(thepositiveratewas15.56%),theHBVDNApositivesub2stancewaslocalizedmostlyinnucleiofthehepatocytes,afewofHBVDNAincytoplasm.Conclusion:HBVDNAcanbefoundinthelivertis2suesofpatientswithHBVserummarker2negativehepatitis.Thiswillcontri
5、butetothediagnosisofHBVinfection.KeywordsHBVHBV2markerInsituhybridization 随着分子生物学的发展,采用敏感性高,特异性国传染病寄生虫病学术会议修订的病毒性肝炎防治强的分子杂交和单克隆抗体技术,可以在患者血清方案)而确诊。和肝组织内发现极低水平的HBV,即使HBV血清标112 方法 肝组织原位杂交检测:①探针制备:将志物阴性者的体内,也可有HBV潜伏或低水平的复带有HBV全基因组的重组质粒PCP10,经PCR扩增制。HBV在患者肝内潜伏的分子机制,主要是由于获得500bp的S基因片段。以
6、DNA回收试剂盒回HBV基因组发生突变所致。为此,我们应用HBV收后,将其作为裸探针,并按地高辛标记试剂盒(德DNA的原位杂交对45例血清标志物阴性的肝炎患国BM公司)中的说明书,制备地高辛2HBVDNA探者的肝组织进行了研究。针。标记的探针置于-20℃保存备用。②原位杂交1主要步骤:常规脱蜡入水,用012molPLHCI于室1 材料与方法温消化20min,加入600μgPL的地高辛标记探针于111 研究对象 肝穿刺活检组织45例,均取自42℃杂交过夜。经系列SSC洗涤,20mlPL的羊血清1995～1997年解放军第一医院传染科住院患者,用封闭后,加入1∶
7、500的抗地高辛抗体2碱性磷酸酶,ELISA法检测血清HBV标志物及常规PCR检测血于37℃作用2h,加底物NBTPBCIP于暗处显色3h,清HBVDNA均为阴性。其中男性39例,女性6例,镜下观察结果。③特异性确证试验:(1)空白对照:年龄12～56岁,平均(2717±1016)岁。45例中、急(a)以不含探针的预杂交液代替Dig2HBV标记探针,性黄疸型肝炎(急黄肝,24例);慢性肝炎17例(轻对HBVDNA阳性肝组织切片进行杂交;(b)用未标度13例、中度3例、重度1例),肝硬变4例。全部记的探针进行杂交反应;(c)切片用DNase或RNase病例均经
8、临床及组织病理学诊断(按1995第5次全预处理后再杂
