生物化学实验内容.doc

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1、《生物化学实验》内容课程类型：制药工程专业必修实验总学时：32课时开设实验项目数：8个适用对象：2017制药工程1、2班实验教师：段志芳一、实验目标及基本要求生物化学实验是一门独立的实验课程，培养学生生物化学实验基本操作技能、实验数据处理能力、分析问题解决问题的能力和实事求是的科学态度。二、实验内容序 号实 验 项 目学 时实 验 要 求实 验 类 别1植物组织中可溶性总糖的提取4必 修验证性实验2蒽酮比色定糖法4必 修验证性实验3卵磷脂的提取和鉴定4必 修验证性实验4皂化价的测定4必 修验证性实验5牛乳中酪蛋

2、白的制备4必 修验证性实验6蛋白质浓度测定（考马斯亮蓝结合法）4必 修验证性实验7酵母RNA的提取4必 修验证性实验8RNA的定量测定（苔黑酚法）4必 修验证性实验三、成绩包括实验时的表现（实验出勤、安全卫生、操作对错、损坏器皿情况等，占50%）及实验报告的完成情况和完成质量（占50%），每个实验按总分为100分为满分进行打分，共8个实验，总评取平均值。四、要求（1）   实验过程中同组人可以配合进行；（2）   实验报告独立完成，同组人数据相同，不得抄袭他组数据；（3） 实验过程若出现失误应向老师汇报后再进行

3、重做；（4） 对实验结果进行简单的分析.14实验一植物组织中可溶性总糖的提取一、实验目的1.掌握可溶性总糖的概念和性质。2.掌握可溶性总糖提取的基本原理。3．掌握溶解、过滤、洗涤、定容等基本操作技术。二、实验原理可溶性糖是指易溶于水的糖，包括绝大部分的单糖、寡糖，常见的有葡萄糖、果糖、麦芽糖和蔗糖等。它们在植物体内可以充当能量的储存、转移的介质、结构物质和功能分子如糖蛋白的配基。总糖主要指具有还原性的葡萄糖、果糖、戊糖、乳糖和在测定条件下能水解为还原性的单糖的蔗糖、麦芽糖以及可能部分水解的淀粉。可溶性总糖提取方

4、法包括：热水提取法、酶提取法、超声波提取法等。其溶于热水，不溶于60%以上乙醇，所以用热水提取、乙醇沉淀除去部分醇溶性杂质。本实验利用可溶性糖溶于水的特性，将植物磨碎，用热水将组织中的可溶性糖提取出来，结合实验二得到总糖浓度，已知溶液体积和原料重量，可以求出总糖含量。三、实验用品1.仪器设备：电子天平（精确到0.0g，配称量纸若干）；可控温电加热板或电炉或电热套或水浴锅均可。可共用。2.玻璃器皿：研钵1套；100mL锥形瓶1个；25mL量筒1个；玻璃棒1根；100mL烧杯2个；胶头滴管1支；过滤装置1套（铁架台

5、1台+铁圈1个+玻璃漏斗1个+100mL容量瓶1个+洗瓶1个）；不锈钢刮勺1个；剪刀1把。此部分为每组所用，集中到小框里，放置各实验台上。3.药品试剂：新鲜植物叶片；蒸馏水。4.其他：9cm滤纸若干（与玻璃漏斗配套）；纸巾若干；标签纸若干。每个洗手池常规配置烧杯刷、毛巾、洗手液。四、实验操作取新鲜植物叶片，洗净表面污物，用滤纸吸去表面水分。称取0.5g，剪碎，加入5～10ml蒸馏水，在研钵中磨成均浆，转入锥形瓶中，用蒸馏水少量多次冲洗研钵，洗出液也转入锥形瓶中，塑料薄膜封口，于沸水中提取30min，提取液冷却后

6、过滤到100ml容量瓶中，同法残渣再提取2~3次，将提取液合并至容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度。贴好标签，保存至冰箱中，用于实验二。五、实验结果与讨论1、观察产品颜色是否与理论相符，若不符合，分析原因。2、结合实验二结果计算含量六、实验注意事项14（1）若有干扰，可滴加饱和中性醋酸铅以除去溶液中的蛋白质，乙醇沉淀除去部分醇溶性杂质，若色素较多可脱脂。（2）加热时应小心，避免灼伤皮肤。七、思考题1、可溶性糖在植物物质代谢中的作用。2、用水提取的糖类有哪些？实验二蒽酮比色法测定可溶性总糖含量一、实验目的1、掌握蒽酮比

7、色法测定可溶性总糖的原理和方法2、掌握标准曲线的绘制3、掌握分光光度计的使用方法二、实验原理糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛，生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比，故可用于糖的定量测定。该法的特点是几乎可以测定所有的碳水化合物，不但可以测定戊糖与己糖含量，而且可以测所有寡糖类和多糖类，其中包括淀粉、纤维素等(因为反应液中的浓硫酸可以把多糖水解成单糖而发生反应)，所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。

8、糖类与蒽酮反应生成的有色物质在可见光区的吸收峰为620nm，故在此波长下进行比色。三、实验材料、试剂与仪器设备1、仪器分光光度计（配玻璃比色皿、擦镜纸、注明废液回收的具塞广口瓶、洗瓶）；电子天平（配称量纸）；离心机（配离心管），恒温水浴锅。2、玻璃器皿0.5mL、1mL、5mL刻度吸管各2支（配合适大小吸耳球）；10mL具塞具刻度试管10支（应干净干燥，放到试管架上）；100mL烧杯2