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1、第39卷第4期四川大学学报(工程科学版)Vo.l39No.42007年7月JOURNALOFSICHUANUNIVERSITY(ENGINEERINGSCIENCEEDITION)July2007文章编号:10093087(2007)04007905重组人胰岛素制备工艺李晓红,朱惠玲,余蓉,李红霞(四川大学华西药学院,四川成都610041)摘要:为了提高重组人胰岛素的表达量,用E.coli发酵表达(His)-Arg-Arg-人胰岛素原[(His)-Arg-Arg66-humanproinsulin,RRhPI],并对影响RRhPI高效表
2、达的各主要因素以及下游纯化工艺的各关键步骤进行优化。研究表明,RRhPIE.coli在最优培养基:5g/L胰蛋白胨,2g/L谷氨酸,7g/L酵母浸膏,0.5g/L酸铵,2.5g/L葡萄糖,2.7g/L甘油,100mg/L氨苄青霉素,50mg/L卡那霉素,pH7.2的条件下,用发酵罐进行发酵,在对数生长中期加入0.5mmol/LIPTG诱导4h,发酵过程中通过补料和转速调节,每升培养基能收获湿菌体51.2g,包涵体16.2g。在下游纯化工艺中,初步纯化前包涵体溶解液中一定浓度的-巯基乙醇以及复性液中一定浓度的氧化型谷胱甘肽将有助于RRhPI的复性。经
3、过工艺条件的优化,人胰岛素最终收率可达74mg/L培养基。关键词:(His)6-Arg-Arg-人胰岛素原;重组人胰岛素;大肠杆菌中图分类号:Q578;Q786文献标识码:APreparationofRecombinantHumanInsulinLIXiaohong,ZHUHuiling,YURong,LIHongxia(WestChinaSchoolofPharmacy,SichuanUniv.,Chengdu610041,China)Abstract:Toobtainrecombinanthumaninsulin(rhI),(His)6-A
4、rg-Arg-humanproinsulin(RRhPI)wasexpressedbyEscherichiacoli(E.coli).Intheoptimummediumof5g/Ltryptone,2g/Lglutamicacid,7g/Lyeastextrac,t0.5g/Lammoniumsulfate,2.5g/Lglucose,2.7g/Lglycero,l100mg/Lampicillin,50mg/Lkanamycin,andpH7.2,andwiththeadditionof0.5mmol/LIPTGatintermediateex
5、ponentialphaseandinductionfor4h,51.2gwetE.coliand16.2ginclusionbodywereharvestedfrom1Lmediuminfermenter.Theresultsshowedthatcertainconcentrationof-mercaptoethanolininclusionbodysolutionandoxidizedglutathioneinrefoldingsolutionwerehelpfultoRRhPIrefolding.Withthewelloptimizedte
6、chnology,74mgrhIwasobtainedfrom1Lculturemedium.Keywords:(His)6-Arg-Arg-humanproinsulin;recombinanthumaninsulin;E.coli目前,国际上生产医用重组人胰岛素(recombiB链,然后经化学再氧化法,使两条链在一定条件下nanthumaninsulin,rhI)的方法主要有3种:重新形成二硫键,得到hI。这一方法缺点较多,目1)用基因工程大肠杆菌(Escherichiacoli,E.co前已较少使用;li)分别发酵生产人胰岛素(hum
7、aninsulin,hI)的A、2)用基因工程E.coli发酵生产人胰岛素原(humanproinsulin,hPI),后经加工形成hI。E.coli系统收稿日期:2006-01-20表达量高,但缺点是不利于表达hI这样的小蛋白,基金项目:科技部创新基金资助项目(06C26215100476)产物易降解,故常采用融和蛋白形式将hPI连接在作者简介:李晓红(1973-),女,讲师,研究方向:微生物与生化药学.一个较大的蛋白质后,表达产物需经过一系列复杂的后加工才能形成有活性的hI;80四川大学学报(工程科学版)第39卷3)通过基因工程酵母菌发酵生产
8、hPI,经后加1.4包涵体的收集和洗涤工形成hI。酵母系统下游后加工比细菌表达系统将收集的湿菌体冻存于-2
