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《重组人胰岛素的制备_下游纯化工艺的研究_余蓉》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、生物医学工程学杂志2004;21(5)∶805～808JBiomedEng重组人胰岛素的制备—下游纯化工艺的研究1,2112,$余蓉李晓红杨继虞吴梧桐1(四川大学华西药学院生物制药教研室,成都610041)2(中国药科大学生命科学与技术学院,南京210009)摘要建立了一套通过大肠杆菌表达(His)62Arg2Arg2人胰岛素原[(His)62Arg2Arg2humanproinsulin,RRhPI]制备重组人胰岛素的工艺。将大肠杆菌中以包涵体形式表达的RRhPI依次经过DEAE2琼脂糖快流速阴离
2、子交换层析,SephadexG225层析,重组复性酶切转化和Superdex75分子筛,制备重组人胰岛素。SDS2PAGE、HPLC、氨基酸组成分析和小鼠惊厥实验结果证明,制备的重组人胰岛素具有天然生物活性,而且纯度较高。关键词重组人胰岛素纯化DEAE2琼脂糖快流速阴离子交换剂Superdex75PreparationofRecombinantHumanInsulin—StudyofDownstreamProcess1,2112,$YuRongLiXiaohongYangJiyuWuWutong1(
3、DepartmentofBiopharmaceutics,WestChinaSchoolofPharmacy,SichuanUniversity,Chengdu610041,China)2(TheSchoolofLifeScience&Technology,ChinaPharmaceuticalUniversity,Nanjing210009,China)AbstractThisstudywasintendedtoestablishamethodofpreparationofrecombinanth
4、umaninsulin,with(His)62Arg2Arg2humanproinsulin(RRhPI)expressedbyEscherichiacoli.AfterDEAE2SepharoseFastFlowion2exchangechromatography,SephadexG225chromatographyandrefolding,enzymecleavageandSuperdex75sizeexclusionchromatography,theRRhPIexpressedbyEsche
5、richiacoliininclusionbodyformwasconvertedtohumaninsulin.TheobtainedrecombinanthumaninsulinwasanalyzedbySDS2PAGE,HPLC,aminoacidcompositionanalysisandbioidentitytest(mouseconvulsiontest).Theresultsindicatethatourobtainedpreparationishighlypureified,activ
6、erecombinanthumaninsulin.KeywordsRecombinanthumaninsulinPurificationDEAE2SepharosefastflowSuperdex751引言RRhPIöpQE240大肠杆菌M15菌株。2.2主要试剂分离纯化是基因工程药物生产中极其重要的一DEAE2琼脂糖快流速阴离子交换剂为杭州争环,这是由于工程菌经过大规模培养后,产生的有效光树脂有限公司产品,Sephadex为Sigma公司产成分含量很低,杂质含量却很高;另外由于基因工程品,Supe
7、rdex75为Amersham公司产品,胰蛋白酶药物是从转化细胞,而不是从正常细胞生产的,因此和羧肽酶B均为Sigma公司产品,低分子量蛋白标对产品的纯度要求也高于传统产品。所以要得到合准为上海东风生物技术有限公司产品,人胰岛素标乎医用要求的基因工程药物,分离纯化要比传统产准品为RocheDiagnosticsCorporation产品,谷胱品困难得多。在重组人胰岛素(Recombinanthuman甘肽(氧化型和还原型)为上海博奥生物科技有限公insulin,rhI)的基因工程生产中,同样面临着下
8、游处司产品,DTT为OrganicsInc.产品,其它化学试剂理非常复杂的问题。为了能有效地纯化目的产物,目均为国产或进口飞行纯。前基因工程生产中普遍使用的是亲合层析和HPLC2.3菌培养和RRhPI的表达等手段,这些分离纯化技术虽然分辨率高,特异性参照文献[1]。强,但十分昂贵。不利于降低成本。为了降低生产成2.4包涵体的收集和洗涤本,本研究建立了一套由(His)62Arg2Arg2人胰岛素参照文献[1]。原[(His)62Arg2Arg2humanproinsul
