实验二 油镜的使用、细菌的单染色及革兰氏染色课件.ppt

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1、实验二油镜的使用、细菌的单染色及革兰氏染色（一)、油镜的工作原理增加照明强度当光线由反光镜通过玻片与镜头之间的空气时，由于空气与玻片的密度不同，有些光线会因折射或全反射，不能进入镜头，降低了视野的照明度；若中间的介质是一层油（其折射率与玻片的相近），则几乎不发生折射，增加了视野的进光量，从而使物象更加清晰。增加显微镜的分辨率：D=λ/2NA=λ/2n·sin(α/2)D：分辨率NA：物镜的数值孔径值：可见光的波长（平均0.55m)n:物镜和被检标本间介质的折射率：镜口角（即入射角）显微观察低倍镜观察高倍镜观察油镜观察在待观察的

2、样品区域滴加香柏油，从侧面注视，用粗调节器将镜筒小心地降下，使油镜浸在镜油中。显微镜用毕后的处理上升镜筒，取下载玻片；用擦镜纸拭去镜头上的镜油，然后用擦镜纸沾取少量乙醇乙醚洗液擦去镜头上残留的油迹，最后用干净的擦镜纸擦去残留的乙醇乙醚洗液；用擦镜纸清洁物镜及目镜，用绸布清洁显微镜的金属部件；将镜体各部分复原。（二）简单染色法目的要求学习微生物涂片、染色的基本技术，掌握细菌的简单染色法；初步认识细菌的形态特征；巩固显微镜（油镜）的使用方法和无菌操作技术。基本原理借助物理因素（如：细胞及细胞物质对染料的毛细现象、渗透、吸附作用等）和化学

3、因素（如：正负离子之间的相互吸引等）的作用而进行的。实验器材菌种大肠杆菌约24h营养琼脂斜面培养物枯草芽孢杆菌12-18h营养琼脂斜面培养物藤黄八叠球菌约24h营养琼脂斜面培养物染色剂草酸铵结晶紫染液番红染液仪器或其他用具显微镜、酒精灯、载玻片、接种环、无菌水等。操作步骤涂片干燥固定染色镜检水洗干燥实验结果根据观察结果，绘出细菌形态图。思考题（书P28五、2.（2）（3））为什么要求制片完全干燥后才能用油镜观察？如果你的涂片未经加热固定，将会出现什么问题？如果加热温度过高、时间太长，又会怎样呢？（三）革兰氏染色法目的要求学习并初步掌

4、握革兰氏染色法；了解革兰氏染色法的原理及其在细菌分类鉴定中的重要性。实验器材菌种枯草芽孢杆菌12-18h营养琼脂斜面培养物大肠杆菌约24h营养琼脂斜面培养物藤黄八叠球菌约24h营养琼脂斜面培养物染色剂草酸铵结晶紫染液卢戈氏碘液95%乙醇番红染色液仪器或其他用具显微镜、酒精灯、载玻片、接种环、无菌水等。操作步骤藤黄八叠菌纯培养的镜下形态（革兰氏染色）大肠杆菌纯培养的镜下形态（革兰氏染色）实验结果列表说明你所观察到的细菌形状、颜色和革兰氏染色反应。菌种形态颜色革兰氏鉴定思考题（书P30五、2.（1）（2）（6））你认为哪些环节会影响革兰

5、氏染色结果的正确性？其中最关键的环节是什么？现有一株细菌宽度明显大于大肠杆菌的粗壮杆菌，请你鉴定其革兰氏染色反应。你怎样运用大肠杆菌和金黄色葡萄球菌为对照菌株进行涂片染色，以证明你的染色结果正确性。你认为革兰氏染色中，哪一个步骤可以省去而不影响最终结果？在什么情况下可以采用？