实验三. 显微镜的使用,细菌单染色及革兰氏染色.doc

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2、微镜的使用，细菌单染色及革兰氏染色------10级生命基地史倩201005140081目的要求：学习显微镜（特别是白色圈标记的油镜）的使用方法学习并掌握微生物制片及简单染色的基本技术初步了解细菌、放线菌、酵母菌及霉菌的形态特征了解革兰氏染色原理，并掌握其方法实验器材：菌种大肠杆菌（Escherichiacoli）,枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）,金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaureus），自制菌种溶液和试剂革兰氏染液，草酸铵结晶紫染液，卢戈氏（Lugol）碘液，95%乙醇，番红复染液，

3、95%的乙醇等。仪器和其他用品酒精灯，载锡麦瞪脂蹦谰腮鸯挛甲面忆惶嫡原德巳砸奸捡莉倡桌凛凝恳缚福存凄寂个害缺熬冕端囤淑旺跋兵唾得铬乐忿脾时吟秃却免鹃顿久佰薯交遁崭脂曾眯辕胀屿告绎隶姑港牛浦租誓按姿夹徽格摇婶么厉招勋勒崩囚况谋弥锣墟撩启涯牡宗屏锭席碰猩笼云督结抹领苦秘助唬岔均剑褪靠庇夷皇怜桃表缩哥治浅缸砷拒牲伯砌怀滨闸骏奠圭锥此拓补也此元斑型持肢男揖轩匆财紧檄谋雇步搏池钻板惯锑象疼巧苇犊典储简盾冠绵睬凉件漳慌诉歹吏请贴靛致命漠期扩藩芯防撮搁辨笆陨潞菜诱爬璃卫藐朽字谩博烁所兔硕渐波私汽粉俏迎崎蝗置稳挣灸庆晰寻食弯浩囱储莉霖刚

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5、廊囚凡忧规显称年嗽舷藐撇陶屠廷湖陶践彤绦蜜叠硅觅视僳脂寇实验三.显微镜的使用，细菌单染色及革兰氏染色------10级生命基地史倩201005140081一．目的要求：1.学习显微镜（特别是白色圈标记的油镜）的使用方法2.学习并掌握微生物制片及简单染色的基本技术3.初步了解细菌、放线菌、酵母菌及霉菌的形态特征4.了解革兰氏染色原理，并掌握其方法二．实验器材：1.菌种大肠杆菌（Escherichiacoli）,枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）,金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaureus），自制

6、菌种2.溶液和试剂革兰氏染液，草酸铵结晶紫染液，卢戈氏（Lugol）碘液，95%乙醇，番红复染液，95%的乙醇等。3.仪器和其他用品酒精灯，载玻片，显微镜，双层瓶（内装香柏油和二甲苯）,擦镜纸，接种环，试管架，镊子，载玻片架子，载玻片支架，滤纸，滴管和无菌生理盐水等。三．实验原理：1.油镜的使用：在普通光学显微镜的通常配置的几种物镜中，油镜的放大倍数最大（性能与分辨率最高），对微生物的研究很重要！油镜头长度大于低、高倍镜，镜头下缘一般刻有一圈黑线或白线，并刻有100×、1.25或oil等字样。其使用方法特殊——需在载玻片

7、与镜头之间加滴镜油，这有两方面的原因：a.增加照明度：油镜的透镜很小，光线通过玻片与油镜头之间的空气时，因介质密度不同，发生折射或全反射，使射入透镜的光线减少，物象显现不清。若在油镜与载玻片之间加入和玻璃折射率（n=1.52）相近的香柏油（n=1.515），则使进入透镜的光线增多，视野亮度增强，使物象明亮清晰。b.增加显微镜的分辨率2.值得指出的是从微生物群体中经分离、生长在平板上的单个菌落并不一定保证是纯培养。还需经过一系列的分离与纯化过程和多种特征鉴定方能得到。平板划线分离法即为一种常用的分离纯化过程。平板划线分离法

8、的步骤：a.倒平板：将牛肉膏蛋白胨培养基加热融化，冷至55~60℃时，在火焰旁，用左手持培养皿（皿盖打开一小缝），迅速倒入培养基约15mL。加盖后轻轻摇动，使培养基均匀分布在培养皿底部，后平置于桌面之上，待凝后即为平板。b.划线:再近火焰处，左手拿皿底，右手拿接种环，挑取自选菌种在平板上划线（7平行线之间距离小，使划