酶法测定糖化血红蛋白应用评价

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1、酶法测定糖化血红蛋白应用评价　　[摘要]目的评价酶法测定糖化血红蛋白的可行性。方法酶法和离子交换高压液相色谱分析法（HPLC法）同时检测91例糖尿病患者的糖化血红蛋白，对两组数据进行线性回归分析。结果酶法与离子交换高压液相色谱分析法的线性范围分别是2.5%～15.5%和3.8%～18.5%，批内精密度分别是1.09%和1.17%，批间精密度分别是2.2%和2.8%，酶法测定糖化血红蛋白的结果与离子交换高压液相色谱分析法测定糖化血红蛋白的结果相关性良好，线性方程y=1.0137x-0.072，R2=0.9886。酶法

2、测定糖化血红蛋白结果与HPLC法测定的结果差异无统计学意义（P>0.05）。结论酶法与离子交换高压液相色谱分析法有良好的相关性。酶法在全自动生化分析仪上检测具有效率高、成本低的优点，适合在临床上推广。[关键词]糖化血红蛋白；酶法；离子交换高压液相色谱分析法[中图分类号]R446.11[文献标识码]B[文章编号]1673-9701（2014）09-0080-037糖化血红蛋白是血液中己糖（主要是葡萄糖）的糖基连接到蛋白质的氨基酸残基而形成的。这是一个缓慢的、不可逆的非酶促反应，与血糖浓度和高血糖存在的时间相关[1]。

3、持续的高血糖可增加血液中蛋白的糖化比例，蛋白质与葡萄糖结合后可发生变性，造成多器官功能衰竭，这是引起糖尿病（DM）慢性并发症的一个原因[2，3]。因此，糖化血红蛋白的检测是一个十分重要的检查项目。酶法作为可以在全自动生化分析仪上检测的方法近年来在实验室中得到推广。本文采用可溯源至IFCC的糖化血红蛋白检测试剂盒，特异地测定源于HbA1c糖化二肽，与HPLC法的测定结果进行对比分析以确定酶法测定糖化血红蛋白的应用价值。1资料与方法1.1一般资料2013年1～6月本院内分泌门诊与住院确诊的糖尿病患者91例，诊断标准符合

4、2010年ADA糖尿病标准化诊疗指南[4]。其中男55例，女36例，年龄37～75岁，平均55.1岁。排除贫血、低白蛋白血症等影响糖化血红蛋白测定的疾病。空腹静脉抽血2mL，EDTA-K2抗凝。1.2仪器与试剂1.2.1酶法日立全自动生化分析仪7600-020，糖化血红蛋白测定试剂盒（二代酶法）、前处理液、校准品、质控品均由积水医疗科技（中国）有限公司提供。1.2.2离子交换高压液相色谱分析法伯乐D-10糖化血红蛋白检测系统（HPLC法）、糖化血红蛋白检测试剂包及质控品由美国伯乐公司提供。71.3方法1.3.1酶法

5、将全血标本离心，离心速度800×g，5min[5]。吸取25μL红细胞加入500μL前处理液，充分混匀后由日立全自动生化分析仪进行检测。1.3.2离子交换高压液相色谱分析法全血混匀后依照伯乐公司提供的操作规程，利用D-10糖化血红蛋白检测系统进行检测。1.4统计学处理采用SPSS18.0软件对数据进行统计学分析。酶法和离子交换HPLC法的结果相关性采用线性回归分析，两组数据比较采用两样本t检验，P0.05）（表2）。3讨论7糖尿病是一种由胰岛素分泌缺乏或胰岛素抵抗或两者共同作用造成的以高血糖为特征的代谢性疾病[6]

6、。糖尿病的慢性高血糖与各种组织的损伤脏器功能紊乱衰竭有关，特别是眼、肾脏、神经、心脏和血管。长期的高血糖可导致多种并发症的产生，尤其是病程长、病情控制差的糖尿病患者，后期往往会出现感染、糖尿病酮症酸中毒、糖尿病乳酸中毒、血管病变、神经病变[7]。因此，监测糖尿病患者的近期血糖水平尤为重要。糖化血红蛋白作为一个能反映患者2～3个月的血糖平均水平恰好符合这一要求[8]。2002年美国糖尿病协会已将其作为检测糖尿病血糖控制的“金标准”[9]。糖化血红蛋白是血红蛋白在体内与己糖发生缓慢的非酶促化学反应而形成的较为稳定的化合

7、物，而真正与葡萄糖发生结合的血红蛋白为HbA1c，HbA1c由葡萄糖与HbA的β链缬氨酸残基缩合而成，先形成一种不稳定希夫碱，希夫碱解离或分子重排形成糖化血红蛋白。目前实验室中检测糖化血红蛋白的常用方法有以下几种：乳胶免疫比浊法、电泳法、高效液相色谱法（HPLC）、离子交换凝微柱层析法、酶法[10]。乳胶免疫比浊法是利用单克隆抗体或多克隆抗体特异识别缬氨酸β链N-末端糖化的血红蛋白最后4～8个氨基酸组成的抗原表位进行分析测定，但是该方法的校准品得不到溯源，无法保证其准确性[11]。HPLC法作为检测糖化血红蛋白的参

8、考方法具有良好的精密度和准确性，但是它检测成本高并且需要专用昂贵的仪器，不易在临床上推广。酶法是近年来发展的一种简便、快速、准确的方法[12]，它特异地测定源于HbA1c的糖化二肽，在特定的蛋白酶体系中与果糖基氨基酸反应，生成的过氧化氢使显色剂呈现颜色。在全自动生化分析仪上可以通过特定波长检测这种颜色度吸光度，吸光度的大小与颜色深浅成正比。7　　王佑清等[1