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1、酶法与高效液相色谱法测定糖化血红蛋白的结果比对分析摘要：目的评估高效液相色谱法(HPLC)与酶化学法测定糖化血红蛋白的结果相关性和偏倚。方法使用全自动糖化血红蛋白仪D-10采用高效液相色谱法和东芝TBA-120全自动生化分析仪以酶化学法分别测定40例EDTA-K2抗凝血液样本糖化血红蛋口，对结果进行分析比较；计算线性相关系数，直线回归方程和预期偏倚。结果全自动糖化血红蛋白仪D-10高效液相色谱法的测定均值为7.78%,TBA-120全自动生化分析仪酶化学法测定均值为7.74%,线性回归方程为y=1.0349x-0.3111,r2=0.9923
2、,无显著性差异(P>0.05),糖化血红蛋白可接受偏倚大于预期偏倚可信区间上限。结论酶化学法与高效液相色谱法结果相关性良好，可满足临床要求。关键词：高效液相色谱法；酶化学法；糖化血红蛋白糖化血红蛋白Ale(HbAlc)是反映血液中葡萄糖水平的一个中长期指标，国际上通常将其做为糖尿病血糖控制的"金指标”[1]。目前我室采用高效液相色谱法和酶化学法，为给临床提供可靠地检测结果，比较两种检测方法测定HbAlc的差异，探讨其可比性，现参照美国临床实验室标准化委员会（NCCLS）标准的EP9-A2文件[2],对其进行比较分析。1资料与方法1.1—般资料
3、收集我院住院患者糖化血红蛋白标本40例，均为EDTA-K2抗凝全血。1.2仪器和试剂高效液相色谱法:全自动糖化血红蛋白仪D-10及配套试剂标准品；酶化学法：日本东芝TBA-120全自动生化分析仪，试剂和标准品为九强公司提供的HbAlc测定试剂;质控品为美国Bio-Rad公司生产,批号为33860.1.3方法1.3.1精密度实验根据NCCLSEP5-A文件的要求进行精密度实验。采用美国Bio-Rad公司的中值质控和高值质控。批内不精密度实验：同一天将2份质控品连续定20次；批间不精密度实验：将2份质控品测定1次/d,连续测定20d。1.3.2方
4、法学评价以全自动糖化血红蛋白仪D-10高效液相色谱法为比较方法，将标本放置在样本架上直接自动进样测定；另一份标本以东芝TBA-120全自动生化分析仪酶化学法为试验方法，将九强HbAlc试齐忡的al和a2以7：3混合，作为前处理液，将标本混匀，吸取20uL溶于25011L的前处理液中，使红细胞溶解释放血红蛋口，将溶解液放进测试孔位进行测定，反应类型为一点法。依据EP9-A2文件的要求，8个/d标本在不同的分析批测定，将标本按照1〜8和8〜1的顺序做两遍，进行相关性分析和偏倚评估。1.4数据处理1.4.1离群点检验将每一个标本经两种方法的前后两个
5、测定值一一对应，依次求出差值，并计算出所有标本中的平均差值，以4倍的平均差值为判断限值。若仅有一个离群点，将之剔除，继续下述分析；如离群点超过2个，应分析原因，然后再另用标本补做。1.4.2绘制散点图和偏倚图以全自动糖化血红蛋白仪D-10高效液相色谱法的测定结果为X,东芝TBA-120全自动生化分析仪酶化学法测定值为Y,绘制散点图。可以直观的观察异常值、线性程度、偏倚。1.4.3计算线性回归方程y=a+bx和r2。1.4.4临床可接受性判断将b和a以及Xc(HbAlc)医学决定水平值⑶代入SE=
6、(b-1)Xc+a
7、,以SE是否小于或等于1/
8、2CLIA'88规定的允许误差(TEa)判断是否可接受。1.5统计学处理结果以均数土标准差(x±s)表示,显著性检验用t检验，使用SPSS20.0进行统计学分析o2结果2.1精密度评按照临床实验室管理要求批内不精密度低于1/4TEa,批间不精密度低于1/3TEa;经计算求得，糖化血红蛋白两种检测方法的批内CV均小于1/4TEa(6.67%),批间CV均小于1/3TEa(6.67%)，说明试验方法和比较方法的精密度符合要求，比对实验数据可靠，见表2。2.2散点图和偏倚图将40例标本所得的数据绘制成散点图和偏倚图。散点图以东芝TBA-120全自动
9、生化分析仪酶化学法两次测定的均值为Y轴，比较方法以全自动糖化血红蛋白仪D-10高效液相色谱法两次测定的均值为X轴，见图偏倚图以两种方法两次测定均值的差值为Y轴，以高效液相色谱法两次测定的均值为X轴，以直线X=0为水平中线，见图2。图1D-10与TBA-120测定HbAlc的均值散点图图2D-10与TBA-120测定HbAlc的差值偏倚图2.4线性回归计算y=1.0349x-0.3111,r2=0.9923,2.3离群点检验经查方法内,方法间均无离群点。r2>0.95,说明两种方法相关性良好，见图3。图3D-10与TBA-120测定HbAlc的
10、线性回归图2.5高效液相色谱法(HPLC)与酶化学法测定结果HPLC与酶法测定HbAlc无显著性差异（P>0.05）,结果见表22.6偏倚评估把HbAlc医学决定水
